VPA联合ATRA促进子宫颈癌细胞衰老的发生-妇产科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目录 1. 英文缩略表 1 2. 中文摘要 2 3. 英文摘要 4 4. 正文 7 1) 前言 7 2) 材料和方法 8 3) 结果 22 4) 讨论 28 5) 结论 31 6) 参考文献 32 5. 附录 37 6. 致谢 40 7. 综述及参考文献 42 2 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 英文缩略表（abbreviations） 英文缩写 VPA 英文全名 valproic acid 中文全名 丙戊酸钠 ATRA HeLa SiHa HDAC HDACi HATs PBS mRNA DNA DMEM all-trans retinoic acid HeLa SiHa histone deacetylase histone deacetylase inhibitor histone acetyltransferases phosphate-buffered saline messenger ribonucleic acid Deoxyribonucleic acid Dulbeccos modified eagle medium 全反式维甲酸 人子宫颈癌细胞株 HeLa 人子宫颈癌细胞株 SiHa 组蛋白去乙酰化酶 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 组蛋白乙酰化酶 磷酸盐缓冲液 信使核糖核酸 脱氧核糖核酸 细胞培养基 TEMED DMSO Tetramethylethylenediamine Dimethyl sulfoxide 四甲基二乙胺 二甲基亚砜 SDS EB WB Sodium dodeyl sulphate Ethidium Bromide Western blotting 十二烷基磺酸钠 溴化乙锭 蛋白免疫印迹 1 VPA 联合 ATRA 促进子宫颈癌细胞衰老的发生 中文摘要 研究背景 宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌位居第二的女 性恶性肿瘤。近年来宫颈癌的发病率有明显上升和年轻化趋势，发病以每年 2%~3% 的速度增长。早期宫颈癌患者可采用手术治疗，而晚期患者主要以铂类化疗为主， 但毒副作用大，患者易对其产生耐药性，从而限制了进一步的治疗，使患者生存 率大大降低。因此，急需一种有效且毒副作用低的宫颈癌治疗手段。 传统观点认为遗传基因的突变在肿瘤的形成过程中起着至关重要的作用，随 着近年来分子生物学的发展，表观遗传的改变在肿瘤发展中作用被人们所认识， 从而打破了以往“基因决定论”的观点。表观遗传是不依赖于 DNA 序列的遗传现 象，表观遗传异常主要包括 DNA 甲基化异常、非编码 RNA 的异常调节、组蛋白修 饰异常等。越来越多的研究证实，表观遗传异常与子宫颈癌的发生、发展有着密 切关系。 丙戊酸钠（valproate acid,VPA）是一种广谱的抗癫痫药物，同时也是一 种组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂。体外实验证实，VPA 在多种实体瘤和白血病中有抑制细胞增殖、促进凋亡和诱导分化的作用，其高效、 安全、低毒、可口服的特点使之极具临床前景。全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）是维生素 A 的生物活性代谢产物，与其受体结合，具有促进上皮细胞分化 成熟的作用，已作为一种诱导分化剂用于临床肿瘤的治疗。课题组前期的研究已 经证实 VPA 联合 ATRA 可使宫颈癌细胞发生细胞周期阻滞，并诱导细胞分化，但细 胞凋亡增加不明显。在此基础上，进一步分析 VPA 联合 ATRA 的抗宫颈癌作用，观 察其对细胞衰老的影响并探讨其可能的分子机制，从而为寻求新的子宫颈癌治疗 方法提供参考。 目的 ： 研究 VPA 联合 ATRA 诱导子宫颈癌细胞衰老作用，并探讨其分子机制。 2 方法 实验分为对照组、VPA 组、ATRA 组、VPA+ ATRA 组，采用 3 mmol/L VPA、1?mol/L ATRA 单独或联合作用于人子宫颈癌 Hela 及 Siha 细胞，对照组仅加溶媒；采用 CellTiter 96? AQueous 法检测细胞增殖；Annexin V-PE/7AAD 法检测细胞凋亡； β-半乳糖苷酶化学染色法检测细胞衰老；Q-PCR 和 Western blot 法分别检测衰老 相关基因 P16、P63、 hTERT 的 mRNA 和蛋白表达变化；采用免疫组织化学 SP 法检测 P16、P63 及 hTERT 的表达；Cell cycle staining solution 法检测细胞周期 结果 （1） Cell Titer 96 ? AQueous 法检测结果显示，VPA 对 HeLa 及 SiHa 细胞均 有生长抑制作用，与 ATRA 联合抑制效果明显优于单独用药(P0.0