第二章2+子的扩大培养+2006.pptVIP

1 * 一、 三、种子的要求及任务： 总量及浓度能满足要求 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此形象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段 1、谷氨酸生产的种子制备 三 、种子培养方法 1、表面培养法 （surface culturing）：是一种好氧静置培养法。 2、固体培养法(solid culturing)： 3、液体深层培养(liquid submerged culturing) 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称为曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 3、液体深层培养(liquid submerged culturing) 液体深层种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌浆叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。这种由罐底部通气搅拌的培养方法，相对于由气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法来讲，称为深层培养法。 四、影响种子质量的因素 2、温度和湿度 3、培养时间和冷藏时间 4、接种量 (二)影响种子质量因素 2、培养条件：温度、 搅拌（需氧量） 补料 6、种子异常分析 发育异常：过快或过慢 菌丝结团：搅拌、接种量 菌丝粘壁：搅拌、泡沫、装料系数 作业：教材P58页思考与练习题第3、5题 简要说明诱变育种的步骤及注意事项。 影响种子质量的因素有哪些？如何控制种子质量？ 在种子培养过程中，各步骤所使用的培养基成分是否相同，为什么？ 本研究发现，采用被孢霉进行Υ亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体的形态，从而影响菌体干重和Υ亚麻酸产量。 不同接种量影响菌体的生长和发酵 发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高 发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率 20%种子罐＋10%发酵罐前期发酵液效果最好 5、种子的质量标准： 细胞或菌体浓度 形态 （生长处于某个阶段、均匀等等） 生化指标：C、N、P的含量，pH 产物生成量 酶活 无污染 小结： 了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念 理解种子扩培的目的和要求 掌握控制种子质量的基本方法和手段 * 第五节 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与任务 种子制备与培养 种子质量控制 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 种子扩大培养的概念: 二、种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵罐后，能够迅速生长 无杂菌污染 四、种子制备的过程 。 种子罐级数的确定 谷氨酸： 摇瓶 →小罐（一级种子）→二级发酵 青霉素： 小罐（一级种子 ）→中罐（二级种子）→三级发酵 制备种子逐级扩培的次数，一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数 发酵级数确定的依据 级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响 级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一 般2-4级。 在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面 斜面菌种 → 一级种子培养 → 二级种子培养 培养基： 蛋白胨 1%， 牛肉膏1%， 氯化钠 0.5% 琼脂 2%， pH 7.0-7.2 培养条件： 32℃， 生长18-24小时 葡萄糖2%， 尿素0.5%， 玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1% 32℃摇瓶 培养12小时 水解糖2.5%， 尿素0.5%， 玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1% 32℃种子罐 培养7-10个小时 2、青霉素生产的种子制备 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 培养基： 甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养条件： 25℃、 7天, 湿度50% 大米 氮源（玉米浆） 25℃、 7天， 控制湿度 葡萄糖 玉米浆 27℃， 40小时 27℃、