吴琼-分子胞遗传学一.pptVIP

左图：染色体断裂点分析  ——21号染色体长臂断裂点精确定位右图：21q22.2 BAC克隆在Down综合征间期细胞中的杂交信号 FISH检测（chromosome painting)染色体易位 4）多色FISH（muti-color FISH) 多色复合染色体FISH探针(multiplex FISH, M-FISH probes)#两种以上不同的非同位素标记，不同的荧光检测系统，通过不同的滤光片组合或极少数几种非同位素标记探针后，按照不同的比例混合，可以显示多种颜色。 #采取结合或比率标记的方法进行标记探针。在一套特殊的滤光片和计算机软件系统辅助下，可制作24条染色体的彩色核型。应用：(a)染色体数目和结构异常及断裂点分析——多色FISH或M-FISH (b)标记染色体识别——多色FISH或M-FISH (c)不同种属间基因组同源性比较——多色FISH (d)多个DNA片段同时定位——多色FISH**M-FISH不能检测染色体内的倒位、小片段缺失与重复。 **比较基因组杂交(comparative in situ hybridization)探针位整个基因组DNA，而不是一个点或一个区域，主要用于确定未知区域的DNA扩增或缺失。特别是回避了实体肿瘤染色体制备的难题，是其它FISH方法难以替代的。但操作难度较大。应用：(a)肿瘤遗传学研究——发现新的癌基因和抑癌基因； (b)相关种属间和同一种属内不同个体之间基因组差异； (c)染色体不平衡片段识别和染色体重排研究。 **染色质 fiber FISH染色质从细胞中释放出来后，做FISH。信号由中期或间期的点状，形成线状排列。可提高定位的分辨率。应用：(a)估计cosmid和YAC或BAC克隆重叠群的重叠程度，以及 gap的有无和大小； (b)确定DNA微小缺失与重复； (c)染色质结构研究。 **引物原位标记或DNA合成 (PRIMED In Situ labeling / Primed In Situ DNA synthesis, PRINS)特点：(a)背景低； (b)分析时间短； (c)信号强。**DNA fiber FISH杂交靶不是细胞或染色体等组织，而是DNA克隆。 * 分子细胞遗传学 原位杂交(In situ hybridization)1）同位素原位杂交(Isotopic in situ hybridization) ——70年代 2）非同位素原位杂交(Non-isotopic in situ hybridization) ——80年代中后期 （1）免疫酶联 （2）荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH)**同位素原位杂交的不足之处：1）不稳定；2）低特异性；3）高背景；4）暴光时间长；5）结果统计学处理繁琐。Lichter P. Cremer T. Ward D.C. FISH: (Fluorescent In Situ Hybridization).FISH is the detection of highly specific DNA probes which have been hybridized to either interphase or metaphase chromosomes using fluorescence microscopy. DNA for probe use is labeled with fluorescent (direct method) or non fluorescent molecules which are then detected by fluorescent antibodies (indirect method). The probes bind to a specific region or regions on the target chromosome. The chromosomes are then stained using a contrasting color, and the cells are viewed using a fluorescence microscope. **荧光原位杂交的特点：1）快速；2）信号强；3）特异性高；4）多色。**FISH有上述优点的原