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大肠杆菌RNA聚合酶的结构示意图 有关RNA聚合酶的几个知识点： 只有全酶才能在正确位置起始转录。核心酶能在DNA模板上合成RNA，但不能在正确位置起始转录。 σ因子仅能保证细菌RNA聚合酶稳定地结合到启动子上，它通常在RNA链合成8~9个碱基后释放。 RNA链的延伸图解 E.coli trp 操纵子终止位不依赖ρ因子的终止 RNA合成过程 原核细胞mRNA的结构特点 原核生物中rRNA前体的加工 (1) 双链DNA分子以单链为模板； (2) 不需引物； (3) 底物是5`-核苷三磷酸（NTP）； (4) 前一个碱基的 3`-OH和后一个碱基的 5`-P反应，形成磷酸二酯键，RNA链延伸； (5) RNA碱基顺序由模板DNA顺序决定； (6) RNA合成方向是从5`→3`，新生RNA与模板DNA链呈反向平行； 原核生物与真核生物mRNA的特征比较 原核生物mRNA： (1) 许多以多顺反子形式存在； (2) 5`端无帽子结构； (3) 3`端没有或只有较短的poly(A)。 真核生物mRNA结构特征 ： 转录始于核苷三磷酸（经常是A或G）。 初始序列： 5`pppA/GpNpNpNp… 加工后： GpppA/GpNpNpNpNp… 5` 5` 5`-5` Gppp+pppGpNpNp… GpppGpNpNp…+PP+P 帽子结构 高等真核生物（不包括酵母）的mRNA的共同特征：poly(A)添加位点上游11-30个核苷酸区域内存在高度保守的AAAAAA序列。 真核细胞mRNA的结构特点 (4) 真核生物mRNA中常含有内含子 原核生物mRNA与真核生物mRNA结构比较 转录翻译发生的区域化部位 细菌mRNA：转录和翻译发生在单一细胞区域化部位；其转录、翻译、降解间隔时间很短或同时进行。 真核生物mRNA：合成与成熟完全在细胞核内发生，而翻译在细胞质中完成；其转录、翻译、降解三者间间隔时间较长。 生命周期 原核生物mRNA寿命较短，通常只能翻译几分钟； 真核生物mRNA寿命较长，可持续翻译几小时。 真核生物和原核生物转录机制的差别 2）增强子(enhancer)： 能显著提高真核生物基因转录效率的一类顺式调控元件。 其核心序列常为8-12bp；是一种远端控制元件，又称上游激活序列（upstream activator sequence,UAS） 启动子与增强子的作用特点 启动子的作用特点: ①一个基因可同时拥有一个及以上启动子 ②启动子位置不定，一般在转录起始点上游。 ③可与增强子共同控制转录起始和强度。 ④发挥功能时除需RNA聚合酶外，还需转录调控因子与启动子区各种调控元件相互作用 帽子结构 酵母酪氨酸tRNA前体的加工 3）沉默子（silencer） 可降低基因启动子转录活性的一段DNA顺式元件。与增强子作用相反。 沉默子的DNA序列被调控蛋白结合后阻断了转录起始复合物的形成或活化，使基因表达活性关闭。 指由调节基因编码的蛋白质，可以控制其他基因的表达。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcription factor,TF)。 2.反式作用因子 真核生物有3类RNA聚合酶和3类启动子，分别各有一套转录因子。 RNA聚合酶Ⅱ的转录因子通常在20个以上，通式为TF ⅡX，“X”表示因子类别。 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ 表 RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子 转录因子 分子量(kD) 功能 TBP 30 与TATA盒结合 TFⅡ-B 33 介导RNA聚合酶Ⅱ的结合 TFⅡ-F 30,74 解旋酶 TFⅡ-E 34,37 ATP酶 TFⅡ-H 62,89 解旋酶 TFⅡ-A 12,19,35 稳定TFⅡ-D的结合 TFⅡ-I 120 促进TFⅡ-D的结合 1）起始复合物(pre-initiation complex, PIC) 的装配及转录起始： 基本上与原核生物相似，也是先形成封闭复合物，再转变为开放复合物，不同之处在于完成起始阶段后，模板还必须进一步解螺旋。(参见教材P40) 3.转录过程 以前认为与TATA盒结合的蛋白因子是TFⅡ-D，后来发现TFⅡ-D实际包括两类成分： TBP