内皮祖细胞 微囊泡 肾脏缺血再灌注损伤综述.pptVIP

Microvesicles derived from endothelial progenitor cells protect kidney from ischemia-reperfusion injury by microRNA-dependent reprogramming of resident renal cell 主讲人：JACKY 文献介绍 来源：Kidney International; published online 11 April 2012. 作者：Vincenzo Cantaluppi et al . 科研机构：University of Torino , Torino , Italy. 文献摘要 EPC 内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。 1997年，Asahara等首次证明循环外周血中存在能分化为血管内皮细胞的前体细胞,并将其命名为血管内皮祖细胞。近年来的研究显示,内皮祖细胞在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路。EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。 MV Microvesicle（MV）是机体内细胞在正常和病理状态下都会分泌的直径在30~1000nm 之间的微小囊泡。多数研究者用MV 来指代具有细胞间信号传递功能的囊泡。细胞把特异的生物活性分子如蛋白质、miRNA 等包裹到MV 中，被运输到相应的受体细胞并调节受体细胞的生物功能。 EPC来源的MV一些基本特征 miRNA 微小核糖核酸( microRNA，简称miRNA ) ，是一类非编码的由 19-24个核苷酸组成的小分子单链RNA,它们能够与靶mRNA的碱基互补配对而起作用，使 mRNA降解或抑制其翻译，从而参与各种重要的生理和病理过程。 miRNA可稳定存在于血清血浆等体液中，有可能作为一种新的生物标志物用于临床，有助诊断疾病或者判断疾病的预后和复发情况，指导用药和选择治疗方式。 实验目的 内皮祖细胞释放的微囊泡对肾脏急性缺血再灌注损伤的动物模型是否有保护效应; 微囊泡对低氧诱导的肾脏上皮细胞和内皮细胞损伤的保护作用的机制研究 实验材料及方法 Wistar 雄性大鼠 EPCs 和 fibroblast细胞 RNase ; siRNA; anti-miR-126 antagomiRS ; anti-miR-296 antagomiRS ; anti-Dicer polyclonal antibody; 实验分组 Bioanalyzer RNA profile miR-126 and miR-296 含量比较 经过不同处理后miR-126和miR-296的含量 实验过程 1、按照分组制作模型，立即尾静脉注射MV。 ↓ 2、实验第二天，所有组，每组处死6只大鼠取样本分析。 ↓ 3、实验第七天，所有组，每组处死6只大鼠取样本分析。 ↓ 4、实验第180天，前四组，每组处死6只大鼠取样本分析。 IRI模型：右肾切除+左肾肾蒂夹闭45min。 MV经由尾静脉注射，30微克。 实验结果 EPC 来源的MV 和成纤维细胞来源的MV的特征及其比较 EPC 来源的MV对 肾脏缺血再灌注损伤的保护作用 EPC 来源的MV对体外培养的低氧管周内皮细胞（TEnCs）和肾小管上皮细胞(TEpCs)的影响 EPC 来源的MV对 肾脏缺血再灌注损伤的保护作用 血肌酐和尿素氮水平 病理学形态检查 细胞凋亡及增殖检测 长期的影响 血清肌酐和尿素氮 MV注射后在体内的分布情况 病理检查 形态学评价 细胞增殖率检测（a、c Brdu；b、d PCNA） 细胞凋亡检测（TUNEL法） 炎细胞浸润 长期结果（六个月后） 小结 以上实验结果表明：EPC 来源的MV 对IRI模型具有保护作用。能使血肌酐、尿素氮减少，细胞增殖加快、凋亡减少。长期结果还能减少间质纤维化，促进血管形成。去除MV中的miRNA-126/296无此效果。 这些MV是 到血管内皮细胞 和 肾小管上皮细胞的呢 不同表面蛋白分子对MV内化的影响 不同来源的MV内化的区别 mv protein surface expressio