紫外分光法B药学(完整版).pptVIP

第三节 基本原理 一、Lamber-Beer定律 二、吸光系数和吸收光谱 三、偏离Beer定律的因素 四、透光率的测量误差 一、Lamber-Beer定律： 描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系 假设一束平行单色光通过一个吸光物体 续前 取物体中一极薄层 续前 二、吸光系数和吸收光谱 1．吸光系数的物理意义： 吸光物质在单位浓度、单位厚度的吸光度 讨论： 1）E=f（组分性质，温度，溶剂，λ） 当组分性质、温度和溶剂一定，E=f（λ）； 2）不同物质在同一波长下E 不同 ； 同一物质在不同波长下的E不同； 3）E↑，物质对光吸收能力↑, 定量测定灵敏度↑。 续前 2．吸光系数两种表示法： 1）摩尔吸光系数ε： 在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数 / 比吸光系数： 在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系 三、偏离Beer定律的因素 （一）化学因素（二）光学因素 （一）化学因素 Beer定律适用的另一个前提：稀溶液 （二）光学因素 1．非单色光的影响： 物质对不同波长的光具有不同的吸收能力 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 续前 续前 讨论： 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论： 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） 选λmax作为测定波长（ΔE↓，S↑且成线性） （见图） 续前 2．杂散光的影响： 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远。 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度改变。 3．反射光和散色光的影响： 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形。 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光的影响： 使光程↑，A↑，吸收光谱变形。 四、透光率的测量误差——ΔT（来自仪器的噪音） 影响测定结果的相对误差两个因素： T 和ΔT 续前 1）暗噪音——与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关 续前 2）讯号噪音——与光讯号有关 第四节 紫外-可见分光光度计 一、主要部件 1．光源： 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 续前 3．吸收池： 玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英——不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 5．记录装置：讯号处理和显示系统 二、分光光度计类型和光学性能： （一）类型 1．单光束分光光度计： 特点： 使用时来回拉动吸收池 →移动误差 对光源要求高 比色池配对 类型： 721型分光光度计 722型分光光度计 751型分光光度计 续前 2．双光束分光光度计： 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 不受光源波动的影响； 可以自动扫描吸收光谱 续前 3．双波长分光光度计 特点： 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 * * 讨论： 1．Lamber-Beer定律的适用条件（前提） 入射光为单色光 溶液是稀溶液 2．在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定 例如：氯霉素(M=323.15)的水溶液在278nm 处有吸收峰。设用纯品配制100mL含有2.00mg的溶液，以1.00cm厚的吸收池在278nm处测得透光率为24.3%,则E和ε为多少？ 溶液中的溶质因浓度改变而有离解、缔合、与溶剂间的作用等原因会使C与A关系偏离定律。 ΔT影响因素：仪器噪音 棱镜——对不同波长的光折射率不同 色散元件 分出光波长不等距 光栅——衍射和干涉 分出光波长等距 钨灯或卤钨灯——可见光源 350~1000nm 氢灯或氘灯——紫外光源 200~360nm 光电池 光电管 光电倍增管 二极管阵列检测器 消除光源波动的影响：