水稻核糖体蛋白基因OsRPL2克隆序列分析及表达载体构建.docVIP

水稻核糖体蛋白基因OsRPL2克隆序列分析及表达载体构建 　　摘要：依据鉴定得到的水稻（Oryza sativa L.）核糖体蛋白质OsRPL2的序列设计了引物，从水稻叶片的cDNA中扩增得到目的片段。并对目的基因序列进行了测序鉴定和序列分析，同时在大肠杆菌中构建水稻核糖体蛋白质基因OsRPL2的原核表达载体pGEX-4T1-RPL2，转化入BL21（DE3）后利用IPTG诱导外源蛋白质表达并检测。结果表明，成功扩增出了水稻核糖体蛋白质基因OsRPL2的cDNA序列，大小为1 570 bp，其编码的蛋白质含有502个氨基酸。根据序列分析的结果，水稻OsRPL2基因与多个植物核糖体蛋白质L2基因具有较高的相似性，并且其编码的OsRPL2蛋白质具有2个与核糖体蛋白质功能相关的功能域。在此基础上，构建了具有pGEX-4T1-RPL2重组子，诱导表达后，纯化得到了带有GST标签的可溶性OsRPL2蛋白质。 　　关键词：水稻（Oryza sativa L.）；核糖体蛋白质基因；原核表达 　　中图分类号：Q781 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）11-2773-05 　　DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.11.056 　　Cloning and Sequence Analysis， Expression Vector Construction of a Ribosomal Protein Gene OsRPL2 from Rice 　　SONG Dan-ni， WANG Chun-tai， LIU Xue-qun， TAN Yan-ping， LIU Xin-qiong， CHENG Gang 　　（South-Central University for Nationalities/Hubei Provincial Key Laboratory for Protection and Application of 　　Special Plants in Wuling Area of China， Wuhan 430074，China） 　　Abstract： On the basis of identified rice ribosomal protein sequences，a primer was designed to amplify OsRPL2 gene from rice（Oryza sativa L.） leaves’ cDNA. The obtained sequence was sequenced and analyzed， meanwhile，inserted into plasmidp GEX-4T1 to generate a prokaryotic expression vector pGEX-4T1-RPL2 which was transferred into the Escherichia coli BL21 （DE3） strain， and then the protein expression was detected after induced by IPTG. The results showed that， the amplified fragment was identical to the cDNA sequence of OsRPL2 and contained a complete open reading frame of 1 570 bp， encoding a protein of 502 amino acid residues. Meanwhile，OsRPL2 gene has a high similarity with several plant ribosomal L2 genes，and the encoded OsRPL2 protein has two domains associated with ribosomal protein function. In addition， the soluble OsRPL2 protein with GST label was purified after IPTG inducing. 　　Key words： rice（Oryza sativa L.）； ribosomal protein gene； prokaryotic expression 　　核糖体蛋白质是真核生物和原核生物细胞中一种丰富的蛋白质，广泛存在于高等植物的细胞质、叶绿体和线粒体中，是生物细胞内重要的细胞器，其蛋白质占细胞蛋白质的15%，在蛋白质的生物合成中起重要作用。