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应用表面增强拉曼光谱技术快速检测尿样中β兴奋剂 　　摘 要 [HTSS]应用表面增强拉曼光谱技术与化学计量法相结合分析克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺3种?β??兴奋剂的标准溶液。在取自10头猪的尿样中，分别添加5个不同浓度的莱克多巴胺 （1～20 mg/L），采用快速的液液萃取法对样品进行前处理，再进行表面增强拉曼测试。结果表明，克伦特罗和沙丁胺醇标准溶液的最低检测浓度为2 　　?SymbolmA@ g/L，莱克多巴胺标准溶液的最低检测浓度为0.1 mg/L；通过偏最小二乘法建立模型进行定量分析，3种药物的实际值与预测值的相关系数 （R?2） 为0.9134～0.9368；本方法可检测尿样中1 mg/L莱克多巴胺，经外部验证后模型的实际值与预测值的相关系数（R?2）为0.881，相对分析误差 （RPD） 为2.83；分析尿液中的莱克多巴胺含量所需时间小于30 min，为快速检测莱克多巴胺提供新途径。 　　关键词 表面增强拉曼光谱； ?β??兴奋剂； 纳米基底； 尿样? 　　 　　收稿；2011?11?10接受? 　　本文系国家“十一五”科技支撑计划课题（No.2008BAD94B09）、上海市浦江人才计划项目（No.09PJ1405200）、上海市科学技术委员会部分地方院校能力建设项目（No.09320503800）、上海市教育委员会重点学科建设项目（No.J50704）资助? 　　* E?mail：kqlai@shou.省略 　　 　　1 引 言? 　　拉曼光谱技术是以拉曼效应为基础建立的以光子为探针，具有快速、无损等优点的分子结构表征技术，但其灵敏度较低??\[1\]?。表面增强拉曼光谱（Surface enhanced Raman spectroscopy, SERS）是纳米尺度上的特殊表面增强光学现象，该技术采用表面粗糙的纳米特殊金属材料（如金、银等），将分析物分子吸附在材料表面，使该物质的拉曼散射信号增强10?4～10??15?倍??\[2，3\]?。SERS技术的灵敏度高，在物理、化学、材料科学等领域具有广阔的应用前景??\[4～6\]?。? 　　?β??兴奋剂具有促进蛋白质合成、加快脂肪代谢、提高胴体的瘦肉率等作用??\[7\]?，曾被用作饲料添加剂，深受养殖户的喜爱。但长期食用含有该类药物残留的食品将对人体健康产生极大的危害，如引起哮喘、心脏疾病等，严重的可危及生命??\[8\]?，因此欧盟、中国等国家禁止在畜禽生产上使用?β??兴奋剂。莱克多巴胺在动物体内代谢速度快，成为克伦特罗最常用的替代品，美国、日本、澳大利亚、加拿大、巴西、泰国等允许在饲养食用动物中使用莱克多巴胺，而欧盟、中国等严禁该药物的使用??\[9\]?。由于不同国家在莱克多巴胺法规上存在差异，所以引起许多贸易纠纷事件。? 　　目前，动物组织和尿液中?β??兴奋剂的检测方法主要有高效液相色谱法??\[10\]?、气相色谱?质谱联用法??\[11\]?、液相色谱?质谱联用法??\[12\]?和酶联免疫法??\[13\]?。色谱法具有准确、灵敏的特点，但样品前处理过程繁琐、检测速度慢，不适于现场大量筛选；酶联免疫法作为一种快速筛选药物残留的方法，具有操作简便、样品容量大、仪器化程度和高分析成本低的特点，但酶联免疫法的影响因素多，易出现大量假阳性结果，因而研究建立快速、简便、高效的检测?β??兴奋剂的方法一直是食品质量与安全研究领域的热点。? 　　本研究以商业化的金纳米颗粒为基底，利用SERS技术对3种?β??兴奋剂的标准溶液及猪尿中的莱克多巴胺进行定性与定量检测，并将化学计量法与SERS技术结合，以消除测量环境等因素的干扰，提高SERS方法分析结果的准确性，为实现对?β??兴奋剂残留的现场、快速分析检测，加强食品安全与质量监控提供技术支持。2 实验部分? 　　2.1 仪器与试剂? 　　DXR显微共聚焦拉曼光谱仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司）；Klarite??TM? 金纳米基底（英国?Renishaw? Diagnostics 公司）；TDL?5?A低速离心机（上海安亭科学仪器厂）；R206B旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）。克伦特罗、莱克多巴胺（德国Dr. Ehrenstorfer GmbH公司，纯度为98%）；沙丁胺醇（?Sigma?Aldrich公司?, S8260）；甲醇（?Sigma?Aldrich公司?，色谱纯）；乙酸乙酯、氢氧化钠、硼砂（国药集团化学试剂有限公司，分析纯）；实验用水为超纯水；尿样采于上海祥欣养殖场。? 　　2.2 实验方法? 　　2.2.1 样品制备 （1） 标准溶液的配制：移取适量贮备液于容量瓶中，用50%甲醇分别稀释至0.002, ?0.005?,