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食品微生物学检验技术 培养基制备 玻璃器皿的清洗 新购的玻璃器皿 将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。 常用旧玻璃器皿的洗涤 确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗涤剂进行刷洗； 带菌玻璃器皿的洗涤 凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗。 培养基制备 培养基分类 根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分： 天然培养基 是利用各种动、植物或微生物的原料，成分难以确切知道。主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。这种培养基的稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。 合成培养基 是用已知化学成分的化学药品配制而成。化学成分精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。 半合成培养基 在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。这种培养基在生产实践和实验室中使用最多。 培养基制备 培养基分类 根据培养基的物理状态来区分： 液体培养基 所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。 固体培养基 在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用。固体培养基在实际中用得十分广泛。 半固体培养基 如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2-1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。 培养基制备 培养基分类 根据培养基的用途来区分： 选择培养基：在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基。如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。 ?增殖培养基：常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。 培养基制备 培养基分类 根据培养基的用途来区分： 鉴别培养基：在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基。 有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。 培养基制备 影响因素 洗涤剂中含有表面活性剂，会影响微生物生长，注意冲洗干净。 一般不采用自来水配制培养基，因为自来水相对杂质较多，有些含有较多的Ca2+、Mg2+离子，可与蛋白胨、肉浸汁中的磷酸盐生成磷酸钙、磷酸镁，一旦高压灭菌后，就会析出沉淀，从而影响到培养基的透明度，不利于微生物的培养与观察。 蒸馏水或纯净水中所含的杂质较少，所制成的培养基透明度高，有利于观察。 培养基制备 制备： 准确称取各组分，一次完成，不要中断； 混合后，煮沸或者热水溶化，充分溶解； 分装，装量2/3容积 灭菌，高压灭菌的温度与时间随培养基的种类不同而有所差别。含糖类物质培养基（如乳糖胆盐发酵培养基）则灭菌温度不能过高，以免糖类物质被破坏，影响培养微生物的观察效果。 灭菌后用不完的培养基4℃以下存放 含琼脂培养基：控制水浴温度，水浴时间不宜超过4h；若在4h内不能及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用前再进行复溶。但不可多次复溶，否则会影响培养基的pH值，并导致凝胶强度下降。 加水时避免干粉挂壁粘底，加热时避免烧糊。 除个别特殊品种含有不溶成分外，应澄清，无絮状物，无沉淀。 培养基制备 注意事项 培养基所用化学药品均应是化学纯。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长; 因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行PH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降pH0.2，而肠浸液pH却会有显著的升高。 培养基的分装，应选择适当容器:液体分装至试管1/4左右为宜；如固体则分装量为管高的1/5；半固体培养基，则分装至试管的1/2-1/3为宜；锥形瓶分装培养基时，容量应不超过容积的2/3为宜；Φ＝9cm的培养皿一般可倒入15ml培养基。 一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌20分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分