转染bnip3基因对人骨肉瘤mg-63细胞增殖活性及凋亡的影响-effect of transfection of bnip 3 gene on proliferation and apoptosis of human osteosarcoma mg - 63 cells.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 转染 BNIP3 基因对人骨肉瘤 MG-63 细胞增殖活性及凋亡的影响 中文摘要 【目的】：构建 GV142-BNIP3 真核表达载体并转染骨肉瘤 MG-63 细胞， 观察 BNIP3 基因过表达对人骨肉瘤 MG-63 细胞增殖活性及凋亡的影响。 【方法】：以脂质体 LipofectamineTM 2000 介导的方法将含 BNIP3 全长基 因的真核表达质粒 GV142-BNIP3 转染入 MG-63 细胞中，用 RT-PCR 和 Western blot 法检测 BNIP3 的 mRNA 和蛋白的表达。CCK-8 法检测目的 基因转染后细胞的增殖情况,流式细胞仪检测周期和细胞凋亡。 【结果】：BNIP3-GV142 真核表达载体构建成功并成功转染骨肉瘤 MG-63 细胞，在 48 小时后用 RT-PCR 和 Western blot 法检测到 BNIP3 的 mRNA 和蛋白表达明显增高（P＜0.05）。CCK-8 检测结果显示实验组 MG-63 细 胞增殖力较对照组和空白组降低，差异有统计学意义(P0．05) 。细胞周 期分析结果显示转染重组质粒组与转染空质粒组比，G0/G1 期有明显减少， S 期和 G2/M 期之和的平均值明显增加，P＜0.05，存在 S 期阻滞。流式细 胞仪检测结果显示实验组细胞凋亡较对照组和空白组增加(P0．05)。 【结论】：BNIP3 基因过表达可抑制骨肉瘤 MG-63 细胞的增殖活性，促进 其凋亡，BNIP3 基因可能成为肿瘤治疗的新靶点。 【关键词】： 骨肉瘤；BNIP3 基因；转染；凋亡 Effect of BNIP3 gene transfection on the proliferation activity and apoptosis of human MG-63 osteosarcoma ce ls Abstract 【Objective】 To construct GV142-BNIP3 eukaryotic expression vector and to investigate the effect of BNIP3 gene transfection on the proliferation activity and apoptosis of human MG-63 osteosarcoma cel s. 【 Methods 】 The recombinant eukaryotic expression vector GV142-BNIP3 inserted by the full length cDNA encoding human BNIP3 gene was transfected into MG-63 cel s by LipofectamineTM 2000,the expression levels of BNIP3 mRNA and protein were detected by RT-PCR and Western blot.The proliferation of cel s was assayed by CCK-8 method,A poptosis and cell cycle was observed by flow cytometry. 【 Results 】 The eukaryotic expression vector GV142-BNIP3 was successfully constructed. The target protein was over-expressed in 48 hours after osteosarcoma MG-63 cel s transfected with BNIP3 gene . The proliferation of BNIP3 gene transfection MG-63 cells was lower than that of mock transfected cel s ( P 0.05 ).Cel cycle analysis revealed S phase block. Annexin V-FIT C staining revealed that over-expression of BNIP3 gene increased apoptosis of human MG-63 osteosarcoma cel s. 【 Conclusion】 Over-expression of BNIP3 gene significantly inh