转化生长因子β对成骨细胞增殖 bmp-2及cbfal基因表达的影响-effect of transforming growth factor β on bmp - 2 and cbf al gene expression in osteoblasts.docx

山西医科大学硕士 山西医科大学硕士学位论文 I I 转化生长因子β对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfal 基因表达的影响摘要 目的 初步研究转化生长因子β（TGF-β）在体外对小鼠颅盖骨成骨细胞增殖及骨形态蛋白 -2(BMP-2)及核心结合因子al (Cbfal)mRNA表达的影响，探讨转化生长因子作用于成骨细胞 的可能机制，为临床供一定的理论依据。 方法 1．培养小鼠成骨细胞，并观察其形态和功能。 2．不同浓度转化生长因子β(0、0.01、100ng/ml)作用于原代培养的乳鼠成骨细胞, 采 用MTT(噻唑蓝)比色法测定培养液OD值。 3．不同浓度转化生长因子β(0、0.01、100ng/ml)干预原代培养的乳鼠成骨细胞，通过 RT一PCR方法检测BMP-2和Cbfal的表达水平。 4．统计学方法 实验所得的数据以 x ±s表示，采用spssl3.0统计学软件对实验数据进 行分析，组间比较用LSD—t检验；方差不齐，组间比较用Dunnett T3法检验,P0．05差异 有统计学意义。 结果 1．体外培养的小鼠成骨细胞大多呈长梭形，碱性磷酸酶组织化学染色阳性，培养液 中加入β一甘油磷酸钠及L一抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。 2．不同浓度转化生长因子β(0、0.01、100ng/ml)作用于原代培养的成骨细胞24小时后 可促进其增值，OD值显著增加P0.05，TGF-β可明显促进成骨细胞增殖。 3．通过半定量 RT-PCR 检测原代培养的成骨细胞 BMP-2 和 CbfalmRNA 的表达。结 果显示，随着转化生长因子 β 浓度升高，成骨细胞 BMP-2 和 CbfalmRNA 基因表达升高， 光密度比值明显增加且呈剂量效应关系。对照组与实验组、实验组组间比较，均有统计学 差异(P0.05)。 结论 1. 转化生长因子β促进原代培养成骨细胞增殖。 2. 转化生长因子β通过调节BMP-2和Cbfal基因表达，从而促进成骨细胞增殖、分化及 成熟。 关键词 转化生长因子β，成骨细胞，增殖，骨形态蛋白-2，核心结合因子al II II Effect of transformation growth factor beta(TGF-β) on the proliferation and BMP-2 and Cbfal mRNA expression in cultured rat osteoblast Abstract Objective To study the effect of TGF-βon the proliferation and expression of BMP-2and Cbfal mRNA in primary cultured rat calvarial osteoblasts .And investigate the possible mechanism of aetion on osteoblasts, provide further theorctical basis for clinieal medieation. Methods 1 Culture rat osteoblasts， and observe their morphology and function The rat ostcoblasts are cultured in vitro，the effect of different levels of TGF-β(0、0.01、 100ng/ml)on Primary cultured rat osteoblasts proliferation is assessed by MTT colorimetry after 24 hours, and then detennine their ODmV. The osteoblasts are cultured with different dose of TGF-β(0、0.01、100ng/ml). .The expression of BMP-2 and Cbfal mRNA in Primary cultured rat osteoblasts is analyzed by semiquantative RT-PCR. Statistics analysis:Date are presented as x ±s.All statistical analysis is performed with Windows SPSS 13.0. The groups are determined by LSD.Heterogeneity of variance, the groups are determined by Dunnet