自制无血清培养体系长期培养对hescs“干性”维持和notch1表达的影响-effects of self-made serum-free culture system on.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 观察本实验室自制无血清培养基持续培养扩增 hESCs 对其“干性”的维持以 及 Notch1 的表达变化趋势，以探讨该培养体系长时间培养扩增 hESCs 的效果以 及 Notch 信号激活在维持 hESCs“干性”中的作用。 方法： 收集自制无血清培养基传代扩增至第 20 代、30 代的 hESCs；应用免疫荧光 染色法检测两代 hESCs 特异性标志 OCT4、Nanog、SSEA-4 的表达；碱性磷酸 酶显色法检测两代 hESCs 碱性磷酸酶活性；体外接种 hESCs 至免疫缺陷小鼠， 观察畸胎瘤形成，并行组织切片观察内、中、外三个胚层形成；应用 Real-time PCR、Western-bolt 技术，比较 Notch1 信号分子在两代细胞组分的表达情况，进 行统计分析。 结果： （1）免疫荧光染色法结果：两代 hESCs 细胞均表达 OCT4、Nanog、SSEA-4， 呈强阳性反应； （2）碱性磷酸酶显色结果示：显微镜下观察两代 hESCs 细胞均被染成蓝紫 色，呈强阳性反应； （3）免疫缺陷小鼠畸胎瘤切片可见：分别注射了两代 hESCs 的小鼠形成的 畸胎瘤切片染色提示均有内胚层、中胚层、外胚层组织的形成。 （4）Real-time PCR 技术比较 Notch1 基因在两代细胞中的表达情况：hESCs 的 Notch1