发光法测定菌体ATP含量应用.pptVIP

发光法测定菌体ATP含量 1.实验目的 2.实验原理 3.试剂 4.实验材料与仪器 5.操作步骤及结果 一.实验目的 1.理解ATP的理化特性和生理功能; 2.学会用荧火虫素-荧火虫素酶生物发光法定量测定ATP含量的方法; 3.理解ATP生物发光原理及应用研究。 二.实验原理 生物发光(bioluminescence)在希腊语中表示活着的意思,在拉丁语中表示发光、发亮的意思。目前，生物发光应用最广最主要的是荧光素-荧光素酶反应发出的荧光，荧光素酶存在于荧火虫、水母一上些细菌中，它是生物内产生的一种生物反应蛋白质。 1.ATP生物发光工作原理 荧光素酶-ATP检测法，其化学反应的结果是把化学能转化为光能。细胞内源性的ATP含量可以反应活细胞的数量和活性。其化学反应如下： 当细胞受损或死亡时，其ATP值迅速下降或消失，基于这一原理，检测细胞内的ATP含量，即可反应细胞的存活状况，ATP浓度与活细胞数密切相关。 检测时先将ATP与提取剂充分混合，使细胞壁和细胞膜裂解，释放ATP，再加入荧光素-荧光素酶，ATP在荧光素和荧光素酶的作用下，使其释放磷酸基团同理发出荧光，用生物荧光仪检测相对荧光强度（r