腺病毒包装流程与操作.pdfVIP

腺病毒包装流程及操作 重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领 域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细 胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达 100% ，可全面超越其他病毒载体工具和脂质 体转染；对外源基因容载能力大（可以高达 8Kb ）；不整合基因组；滴度高，操作方便。 因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。 目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒 5 型（Ad5 ），其基因组是36Kb 长的线性双链 DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber ）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从 内吞体（endosome ）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的 复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。 目前最常用的腺病毒包装体系有 AdEasy 和 AdMAX 两种，其共同特点是目的基因首 先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录 复制基因 E1 和 E3 的缺陷(ΔE1, ΔE3) ，其中E3 基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒 包装必需依赖表达 E1 的细胞系，例如 HEK-293 ，HEK-293A 等。