耻垢分枝杆菌m.smegmatis诱导巨噬细胞凋亡及microrna表达变化的研究-study on apoptosis and microrna expression of macrophages induced by mycobacterium smegmatis m smegma tis.docxVIP

组在 6h 时上调，12h 变成轻微下调，24h 和 48h 又为上调，其中 24h 的表达水平 最高；MOI=1 组在 12h 其 Arg-1 水平上调，在 48h 出现轻微下调，MOI=10 组在 48 小时发生了并不明显的水平下调。 4. 细胞感染后 MOI=1 组在早期 atg5、atg7、atg12 的 mRNA 水平均上调，12h 时 atg5 水平进一步升高，但 atg12 却下调至正常水平以下，48h 时 atg7 和 atg12 水平再次上调；MOI=10 组在感染 6、12h 时 atg5 水平上调，6、24h 时 atg7 水平 上调，12h 时 atg12 水平轻微下调。 5.受感染后 RAW264.7 表达相应 microRNA 的情况：其中，MOI=1 组 miR29a 在 6 小时和 12 小时出现上调，随后下调至正常水平以下，MOI=10 组在 6 小时出 现上调，12 小时上调显著，随后恢复至正常水平；miR125b 与 miR146a 情况一致， MOI=1 组均未观察到起水平的变化，仅在 12 小时观察到 MOI=10 组其表达水平上 升；miR155 在 MOI=1 组 48 小时发生下调，MOI=10 组 12 小时其水平上调。 结论：当耻垢分枝杆菌 MC2155 感染 RAW264.7 后，自噬在早期发挥了抑制感 染的作用；随着时间的延长，microRNA29a 和 microRNA146a 的高表达促进了细 菌的增殖，与此同时，microRNA155 表达水平上调，诱导细胞分泌 TNF-α，促进 细胞发生凋亡、促进炎症的发生以抑制细菌的增殖；另外，巨噬细胞来源不同， 对耻垢分枝杆菌 MC2155 的敏感性不同，细胞发生极化的方向也不同。 关键词： 耻垢分枝杆菌； RAW264.7；凋亡；自噬；microRNA 1.前言 结核病（tuberculosis，TB）是一种严重危害人类健康的慢性传染性疾病， 由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染引起，目前全球有约 20 亿人被感染，我国是全球 22 个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球 27 个耐多药结核病流行严重的国家之一，患病人数居世界第二位。结核病虽一度受 到抗结核药物的控制发病率有所下降，但随着耐药株的出现，结核病又呈现出死 灰复燃的迹象。 耻垢分枝杆菌（mycobacterium smegmatis，Msme）是一种革兰氏阳性抗酸 杆菌，在罗氏培养基上 2-4 天即可形成菌落。其细胞壁结构与 Mtb 相同，且两者 有高度同源性。研究证明 M.sme 和 Mtb、卡介苗（BCG）有许多相同的小分子调 节性 RNA HYPERLINK \l _bookmark0 [1]，且 M.sme 生长迅速，被广泛认为其致病能力弱而常被实验室用作研 究 Mtb 的替代菌株。 当 Mtb 侵入机体后，首先对其发生免疫应答的当属固有免疫（innate immune） 中的重要成员——巨噬细胞，而吞噬了结核分枝杆菌的巨噬细胞结局（主要是凋 亡 apoptosis 和坏死 necrosis）与感（macrophage，Mφ）染结局密切相关。普 遍认为，吞噬了 Mtb 的巨噬细胞如果发生凋亡，则是对细菌的繁殖发挥了抑制作 用，并且其形成的嗜酸性囊泡会将细菌包裹起来并递呈出去，从而启动适应性免 疫应答（adaptive immune response），也就是说，凋亡实际上是机体的一个保 护性防御的措施；但是如果巨噬细胞在吞噬了 Mtb 后并不发生凋亡而是走向坏死 的结局，细菌则可以从细胞中逃脱，进而感染其它细胞并且能够造成适应性免疫 应答启动的滞后，使整个免疫系统不能及时对其进行控制 HYPERLINK \l _bookmark1 [2, HYPERLINK \l _bookmark2 3]。于是，怎样调控 感染了结核分枝杆菌的巨噬细胞发生凋亡便成为了许多学者研究抗结核的重点。 自噬（autophagy）是机体通过降解自身成分以维持自身稳定的一种重要方 式 HYPERLINK \l _bookmark3 [4]，最初人们认为只有在细胞营养缺乏的时候才会发生自噬，后来发现当有某 些危险因素（如细菌、病毒）刺激时，细胞也会发生自噬以达到保护自身的目的 HYPERLINK \l _bookmark4 [5]，如果自噬受到抑制，那么则会发生炎症或者是组织的损伤 HYPERLINK \l _bookmark5 [6]。有报道表明， 在 Mtb 感染后，ATP 诱导单核巨噬细胞发生自噬或许是一种快速杀伤胞内菌的方 式，但是其关系还有待进一步的考究 HYPERLINK \l _bookmark6 [7]。 Mic