有氧运动对KKAy小鼠骨骼肌p38MAPK血清TNFα及FFA影响.docVIP

有氧运动对KKAy小鼠骨骼肌p38MAPK血清TNFα及FFA影响 　　摘要：目的：从p38MAPK信号转导通路的角度探讨运动降低糖尿病血糖水平的机制，为运动治疗糖尿病提供科学依据和参考。研究方法：雄性6月龄KK-Ay和C57BL／6J小鼠各12只，按血糖配对后随机分为糖尿病运动组(KE组)和糖尿病对照组(KC组)；正常运动组(CE组)和正常对照组(cc组)。进行坡度0°，速度12m／min，时间30min的跑台运动后，实验检测p38蛋白表达和磷酸化，测定血糖浓度、血清胰岛素和TNF-α、FFA。研究结果：KK－Ay小鼠血糖高于C57BL／6J小鼠，KE组和CE组血糖分别较实验前下降了34％和25％；运动后CE组血清胰岛素浓度比CC组低55％，KE组则较KC组低43％；骨骼肌p38磷酸化水平KC组高于CC组，CE组高于c组，KE组高于KC组；血清TNF-α及FFA浓度KC组明显高于cc组，KE组明显低于KC组。结论：一次性有氧运动可以有效降低KK-Ay小鼠的血糖及血清胰岛素水平，直接激活KK-Ay小鼠骨骼肌p38磷酸化，降低血清TNF-α和FFA水平，并通过p38间接作用于TNF-α、FFA，最终达到降低血糖的效果，这可能是运动降血糖的部分分子机制。 　　关键词：II型糖尿病；KK－Ay小鼠；p38；TNF-α；FFA 　　中图分类号：G804.7 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-3612(2011)02-0055-06 　　 　　Ⅱ型糖尿病是一种多基因遗传性疾病，约占所有糖尿病的90～95％。IR是Ⅱ型糖尿病的主要发病机制之一，IR的发生是由于外周靶组织，尤其是骨骼肌，对正常胰岛素的反应降低所致。随着在分子水平对IR的深入研究发现：胰岛素信号转导障碍在IR中起重要作用。p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶家族成员之一，在胰岛素信号转导中具有重要的作用。研究表明，细胞内p38MAPK信号转导的变化与糖尿病有关，p38MAPK可能在Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗发病机理中具有一定的作用，运动对p38MAPK的调节作用可能是糖尿病运动疗法的部分分子机制。脂肪细胞分泌的TNF-α、FFA等多种细胞因子也与Ⅱ型糖尿病IR有关。TNF-α和FFA均可以通过影响胰岛素的信号转导引起IR，且p38，TNF-α和FFA可能存在交互作用，共同在Ⅱ型糖尿病IR的发生中起着非常重要的作用。而运动对脂肪细胞因子的影响可能是运动治疗糖尿病的机制之一。因此本研究拟对运动对Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌p38及其相关因素(TNF-α和FFA)的影响进行研究，试图从分子水平阐明运动降血糖的部分机制。 　　 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1实验动物与分组雄性6月龄KK-Ay小鼠12只，随机血糖16.7mmol／L，购自中国医学科学院实验动物研究所；雄性6月龄C57BL／6J小鼠12只，购自湖南师范大学基因敲除与转基因动物研究室。分笼饲养，每笼一只，自由饮食和饮水，室温20～24℃，湿度55％～65％，光照10～12h／d。所有小鼠适应性喂养一周后，断尾取血测血糖。小鼠按血糖配对后随机分为：糖尿病运动组(KE组)和糖尿病对照组(KC组)，正常运动组(CE组)和正常对照组(cc组)。分组后经配对样本T检验分析，KE和KC组、CE和CC组血糖均无显著性差异。 　　1.2运动模型所有小鼠均进行3d的适应性跑台运动，坡度均为0°，第一天5m／min×5min，第二天7m／min×5min，第三天7m／min×10min。休息6d后进行正式实验。正式实验时，运动强度按照FemandoP等建立的小鼠运动模型方案界定，糖尿病运动组和正常运动组小鼠进行运动：跑台坡度为0°，速度为12m／min(相当于76％VO2max)，时间为30min。运动时使用小毛刷刺激小鼠尾部，必要时采用声音刺激，未使用电刺激。 　　1.3标本采集和制备血液：运动小鼠30min运动结束后即刻和对照组同时以3％的戊巴比妥钠实施腹腔麻醉术，麻醉后先摘眼球，然后断头取血于离心管中，分离血清，分装于－80℃保存待测。 　　骨骼肌：小鼠断头取血后，仰卧于冰块上，用预冷的手术剪取双侧股四头肌，剔除筋膜，预冷生理盐水冲洗掉血液后，用滤纸吸干水分，立即置于液氮中，随后再转入－80℃超低温冰箱保存备用。 　　1.4主要实验试剂葡萄糖测定试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司，FFA微量测定试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司，抗p38兔多克隆抗体(sc－7149)、抗p－p38兔多克隆抗体(Thr180／Tyr182)均购自美国Santa Cruz公司，抗β－actin兔多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔多克隆抗体购自美国KPL公司，SuperSignal底