扬州大学植物细胞工程第三章植物组织培养再生植株afk7jxhu.ppt

Artificial seed production from encapsulated PLBs regenerated from leaf base of Vanda coerulea Sarmah DK et al., 2010, Current Science * THE END * 通过器官发生形成再生植株大体上有三种方式: 第二种方式为先根后芽; 第三种方式是在愈伤组织的不同部位形成芽和根， 再通过维管组织的联系形成完整植株。 第一种方式是先芽后根; Rapid Multiplication by Transfer of Cultures * （一）胚状体(embryoid )的概念 胚状体(体细胞胚, Somatic embyo)：离体培养中，没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程形成的胚的类似物。 * （二）体细胞胚的发生途径 1、从外植体直接发生 2、经胚性愈伤组织发生 3、悬浮培养细胞发生 * （三）体细胞胚的发生过程: * （四）胚状体（embryoid）特点： 不同于合子胚，因为它不是两性细胞融合产生; 不同于孤雌/雄胚，因为它不是无融合生殖的产物； 不同于器官发生方式形成的茎芽和根，因为它经历 了与合子胚相似的发育过程且成熟的胚状体是双极 性结构。 * （五）影响体细胞胚发生的因素 1、生长素（2,4-D）有利于诱导体细胞胚的形成，但是抑制体细胞胚的发育。 2、培养基中的氮源影响体细胞胚的发生频率。 3、不同基因型间体细胞胚的形成能力有差异。 * 体细胞胚发育再生成植株有两个明显的特点： 一是体细胞胚具有双极性（double polarity）； 二是体细胞胚形成后与母体的维管束系统连系 较少，即出现所谓的生理隔离（physiological isolation）现象。 * 体细胞胚与合子胚的区别: 合子胚在发育初期具有明显的胚柄，而体细胞胚 一般没有真正的胚柄只有类似胚柄的结构。 合子胚的子叶是相当规范的，可以作为分类的依 据，而体细胞胚的子叶常不规范，有时具有两片 以上的子叶。 与相同植物比较，体细胞胚的体积明显小于合子胚。 体细胞胚没有休眠而体细胞胚则直接形成植株。合 子胚在胚胎发育完全进入子叶期以后，经过一系列 的物质积累和脱水就进入休眠。 * * 先决条件：机械、生理隔离 * 生长素中，尤以2，4-D对启动植物细胞脱分化和形成胚性细胞团，植物生长素还可能对膜的生理、乙烯 的合成、细胞壁的合成、细胞器系统的功能，发生直接或间接的影响。 * 少数植株仅用细胞分裂素也可以启动细胞脱分化的实例，可能是外植体内源生长素含量较高所至。 * 愈伤组织途径经历了组织培养技术的所有过程，即从愈伤组织诱导、增殖、芽分化、根分化到形成完整植株，属于真正意义上的组织培养，一切通过其它增殖方式不能成功的植物均可以通过愈伤组织途径获得组织培苗。愈伤组织增殖的特点是成功率高，繁殖系数大，但遗传稳定性较差。对要求遗传稳定性高的作物品种，一般不采用这一途径快繁。 继代的作用：1、持续分裂。2、数量增殖。 * * 原球茎：兰科植物特有的一种器官发生方式，指由一团尚未分化的薄壁细胞组成的上端有顶端生长点和叶原基，下端有不定根，初具球茎形态的球状体。 类原球茎：组织培养中通过诱导适宜的外植体产生的类似于原球茎的结构（protocorm like bodies, PLBs) * 试管苗由于是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100％的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的正常小苗有着很大的差异。所以必须通过炼苗，例如通过控水、减肥、增光、降温等措施，使它们逐渐地适应外界环境，从而使生理、形态、组织上发生相应的变化，使之更适合于自然环境，只有这样才能保证试管苗顺利移栽成功。从叶片上看，试管苗的角质层不发达，叶片通常没有表皮毛，或仅有较少表皮毛，甚至叶片上出现了大量的水孔，而且，气孔的数量、大小也往往超过普通苗。由此可知，试管苗更适合于高湿的环境生长，当将它们移栽到试管外环境时，试管苗失水率会很高，非常容易死亡。因此，为了改善试管苗的上述不良生理、形态特点，则必须经过与外界相适应的驯化处理，通常采取的措施有：对外界要增加湿度、减弱光照；对试管内要通透气体、增施二氧化碳肥料、逐步降低空气湿度等。 另外，对栽培驯化基质要进行灭菌是因为试管苗在无菌的环境中生长，对外界细菌、真菌的抵御能力极差。为了提高其成活率，在培养基质中可掺人75％的百菌清可湿性粉剂200-500倍液，以进行灭菌处理。 * 愈伤组织途径经历了组织培养技术的所有过程，即从愈伤组织诱导、增殖、芽分化、根分化到形成完整植株