6 运用生物技术(第六部分)3.pptVIP

一、导入抑癌基因的基因治疗 正常细胞的癌变过程可以归纳为一系列正常基因的突变或异常表达或异常失活。两个抑癌基因的等位基因中只要有一个有功能就可以抑制正常细胞的癌变过程，而在癌症患者中常常是两个抑癌基因都缺失或突变。 二、针对癌基因的基因治疗 在正常细胞中都有原癌基因存在。正常严格的精细调控。 但一旦两个等位基因中的一个发生了突变，就有可能导致肿瘤发生。在反义疗法中，癌基因常被选作为靶基因，通过适当的方法导入癌基因的反义DNA或RNA，使之与癌基因相结合，阻断癌基因的转录和翻译，使癌基因产物大大减少从而抑制肿瘤的生长。 三、 “自杀”基因 将“自杀”基因导入细胞的基因治疗的方法最初是由Moolten提出，其原理是将一种基因转入癌细胞，这种基因编码的蛋白能把无害的药物前体（prodrug）转变为有毒物质，从而将癌变的细胞杀死。 在某些病毒中就含有能将无害的药物前体转变为有毒物质的酶，这些酶由病毒自身编码，人们称之为自杀基因（suicide gene）或药物敏感基因（drug sensitivity gene）。胸苷激酶基因（tk）是自杀基因中应用最广的一类基因，目前用tk转录入肿瘤细胞，再辅以药物治疗的方法进行治疗是癌症治疗研究中比较活跃的领域。 四、导入细胞因子基因进行基因治疗 将编码细胞因子的基因通过合适的载体导入肿瘤细胞并在其中表达，可以增强机体的免疫能力。 其中使用最广的是IL-2与LAK细胞联合使用，在治疗人黑色素瘤和肾癌方面有一定疗效。 五、导入MHC I类抗原基因进行基因治疗 可以提高人免疫系统对于肿瘤细胞的认别能力，从而诱导产生针对于肿瘤细胞的免疫反应，达到杀伤肿瘤细胞的目的。 六、导入MDR 1基因进行基因治疗 MDR 1编码的是一种称为P-糖蛋白的穿膜蛋白，它可以将对正常细胞有毒害作用的药物泵出细胞，从而保护正常细胞免受药物杀死，增强患者对放疗、化疗的耐受能力。 七、细胞融合法 肿瘤细胞逃避免疫系统的另一种办法是它没有有效的抗原呈递系统，不能给免疫系统提供足够的免疫信号。因此人们设想可以通过把肿瘤细胞与免疫细胞进行融合，从而使肿瘤抗原能够有效呈递。 第八节 其他疾病的基因治疗 艾滋病的治疗 1981年，在美国发现首例获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者。 囊性纤维化的基因治疗 严重综合性免疫缺损症的基因治疗（SCID） 胆固醇疾病的基因治疗 血友病的基因治疗 肝病的基因治疗 遗传性神经疾病的基因治疗 致病原因： ① 受体的突变，从而使信息传递紊乱； ② 酶的突变，从而使相关的代谢紊乱或细胞受到毒害； ③ DNA结合蛋白、神经髓鞘蛋白、细胞骨架蛋白等的突变； ④ 原癌基因的激活或抑癌基因的失活； ⑤ 离子通道蛋白突变，导致相关的膜兴奋失调。 此外，在已克隆的致病基因中，还有一种情况是由于基因中存在不稳定的三核苷酸重复序列的扩展而造成的。有9种遗传性神经疾病是由于这种原因而引起的。 帕金森氏病的基因治疗（Parkinson’s disease，PD） 是一种发生于中老年期的慢性神经系统退化性疾病。该基因治疗方案处于动物试验阶段。 第九节 基因治疗的前景 一、基因治疗的伦理和社会问题 二、基因治疗的技术问题 三、基因治疗的展望 思考题： 目前有哪些基因治疗方式？各有什么特点？ 目前基因治疗中常用的治疗性的基因有哪几类？ 癌症的基因治疗有哪些方案？ 基因治疗的前景如何？存在哪些问题？ 六、染色体外自主复制载体 前面提到的基因治疗载体几乎全部来源于动物病毒，多数要整合入宿主细胞染色体之后才能发挥作用。 随机整合→外源DNA插入的位置不同→插入突变、基因失活、沉默基因激活（如原癌基因）→严重后果。 因此这些载体一般不能用于快速增殖细胞的基因治疗。为克服这些缺陷，正在研究能在染色体外自主复制的载体。 而很多情况下，基因治疗的靶细胞正是那些快速增殖的细胞。 ① 哺乳动物人工染色体 mammalian artificial chromosome，MAC，应具备哺乳动物染色体的全部特征，即有自主复制序列，端粒和着丝粒。迄今为止还没有得到可用于克隆外源基因的含有哺乳动物染色体的复制起始位点、端粒和着丝粒的人工染色体。 ② 来源于EB病毒的载体 EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV） 基因组172 kb，含有84个ORF和反向末端重复序列。 EB病毒制成的载体可以在连续分裂的靶细胞内稳定存在，因而可以用于对快速增殖细胞的基因治疗。 第三节 基因治疗中外源基因导入的化学和物理方法 一、生物学方法 二、化学方法 三、物理方法 一、生物学方法 利用病毒载体与细胞的表面受体的相互认别把外源基因转入受体细胞。以后各节中将详细介绍。 二、化学方法 ① DNA介导的基因转移——是指用磷酸钙微量沉淀外源DNA，然后与靶细胞混合