麦类条斑病菌检疫鉴定方法 征求意见稿.docVIP

××/T ××××—×××× PAGE 2 PAGE 1 中 华 人 民 共 和 国国家质量监督检验检疫总局 发布××××-××-××实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 麦类条斑病菌检疫鉴定方法 Quarantine and Identification of Cephalosporium gramineum Nisikado Ikata （征求意见稿） SN/T ××××—×××× SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 GB/T ××××—200× ××/T ××××—×××× PAGE PAGE I 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：廖芳、罗加凤、郭京泽、崔铁军、刘跃庭、赵卫东、刘鹏、黄国明。 PAGE PAGE 3 麦类条斑病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了植物检疫中麦类条斑病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于针对麦类条斑病菌寄主的种子及随种子携带土壤的检疫。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 2122　进出境植物及植物产品检疫抽样 原理 3.1分类学地位 英文名：cephalosporium stripe 学名：Cephalosporium gramineum Nisikado Ikata 异名：Hymenella cerealis Ellis Ever Cephalosporium acremonium Corda 麦类条斑病菌属菌物界（Fungi）， HYPERLINK /view/200463.htm \t _blank 半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗孢目（Moniliales），丛梗孢科（Moniliaceae），头孢霉属(Cephalosporium Corda)。 3.2鉴定原理 麦类条斑病菌是一种重要的土传病原真菌，也能种传。该真菌主要通过冬小麦、大麦等寄主植物种子及种子携带的土壤传播，其为害症状、形态特征、培养性状和寄主范围等特征是其鉴定的依据。 仪器和用具 4.1 仪器 体视显微镜、光学显微镜（带显微照相装置）、天平（感量0.1 g）、生物安全柜 ４.2 用具 滤纸、烧杯、培养皿、三角瓶、镊子、载玻片、盖玻片、量筒、酒精灯、吸管、接种针等。 试剂和培养基 5.1 试剂 琼脂、玉米粉、无菌水、1％次氯酸钠（NaClO）、95%酒精、25%的乳酸、氯硝胺、甲基立枯磷、三苯基氢氧化锡（又称毒菌锡）等。 5.2 培养基 酸化玉米粉琼脂培养基（acidified corn meal agar，ACMA）。 麦类条斑病菌半选择培养基（Cephalosporium gramineum semi-selective medium，CGSM)：用于从土壤或麦类种子中分离麦类条斑病菌。 （ACMA及CGSM的配制参见附录B）。 现场抽样 按照SN/T 2122规定进行取样，留意种子携带的土块并带回实验室进一步分离。 实验室检验 分离培养 7.1.1 称取15 g～25 g土壤与100 ml无菌水混合15 min，静置后用吸管将悬浮液滴于麦类条斑病菌的半选择培养基（CGSM）培养皿上，置于生物培养箱中15oC黑暗下培养，10～12 7.1.2 挑选干瘪的种子，将种子置于95%的酒精进行表面消毒2 min，灭菌滤纸吸干，用有效成分为1%的次氯酸钠（NaClO）溶液表面灭菌2 min，灭菌水洗涤3次，置于培养皿中灭菌滤纸上室温（20 ℃）24 h，每皿约50粒种子，然后-20 ℃冰冻20 h。将冰冻后的种子移至麦类条斑病菌半选择培养基（CGSM）上，每皿4粒～5粒，转至15 ℃培养箱中黑暗下培养，10～12 d后观察是否出现疑似 7ｄ后观察种子上是否出现黑色小点粒（分生孢子盘），或产生粉红色的粘状物（分生孢子团）。药剂处理过的种子需先洗去表面的种衣剂，再按照上述方法分离。 7.2 鉴定特征 在CGSM培养基上，病原菌菌落湿润，紧缩，大多埋生于基质中，白色、灰色或者淡黄色，由大量的分生孢子梗和分生孢子组成，菌丝相对较少。 菌丝无色，宽1.5 μm～4 μm（多为2 μm），有隔膜，分枝，老熟菌丝内含许多颗粒状物和液泡。 分生孢子梗是菌丝短的分枝，细长，（5 μm～20 μm）×（1.5 μm～4 μm），透明，结构简单，常埋生于基