“生物检验检疫”课程实验教案授课人：陈勇实验一：病料的采.doc

“生物检验检疫”课程实验教案 授课人：陈勇 实验一：病料的采集及病原菌的分离和培养方法 (一)病料采集 学习目的：了解常见病料的采集部位，掌握病料采集注意事项，学会进行常见病料采集。 一：血液的采集 根据检验项目及需要血液料的多少，可以选用静脉采血或心脏采血。 静脉采血 鱼是尾静脉；马，牛，羊犬，猫一般多在颈静脉；成年猪在耳静脉；6个月以内的猪在前腔静脉；禽在翅静脉采血。 前腔静脉的采血术是：猪仰卧，拉直两前肢使两前肢向后与体中线平行。手持针管，针头斜向后内方与地面呈60度角，向右侧或左侧胸前窝刺入，进针2~3厘米即可抽出血液。术后局部常规消毒。 末梢或小静脉采血 马牛可在耳尖部采血：局部剪毛，酒精消毒，用18号针头刺入1厘米左右，血液即可流出。 猪羊兔等可穿刺耳边缘小静脉。 心脏采血 禽或试验小动物需要血量较多时可采用本法。 禽的采血：右侧卧保定，左侧胸部向上，取一个10毫升注射器，接上长约5厘米的 针头，从胸骨脊前端至背部下凹处连接线的中点，垂直或稍向前内方刺入2~3厘米即可。 兔或豚鼠等的采血：在胸部左侧触及心脏跳动处垂直刺入，边刺边抽注射器内塞，将血 取出。 二：其他病料采集 乳汁的采集 乳头及术者的手用新洁尔灭消毒，将最初挤出的乳汁弃去，采10~20毫升左右乳汁与灭菌容器中。 脓汁，鼻液，水疱液，水肿液的采集 用灭菌棉拭子蘸取脓汁于灭菌试管中。未破的脓肿，水疱液，水肿液等无菌注射器吸取， 注入无菌容器中。尸体剖检后胸水，心包液，关节囊液等可用灭菌吸管吸取，置于灭菌容器中 粪便的采集 以清洁玻棒挑取新鲜粪便少许（约1克）或用棉拭子自直肠内掏取，置于小瓶内。 肠管的采集 用线扎紧一段肠管（约6厘米）两端，结外剪下置于灭菌容器中。 胆汁的采集 整个胆囊置于塑料袋中或以无菌注射器吸取胆汁于灭菌容器中。 脑和脊髓的采集 采取脑，脊髓于适当保存液中，或将整个头割下，包于锓过0.1%升汞的纱布中，于木 箱中送检。 （七）实质脏器的采集 选择典型病变连同一部分正常组织，切下一，二块，每块不小于4厘米*2厘米*2厘米。 （八）鱼体表、鳃表面的采集 (二)病原菌的分离和培养 一、实验目的： （1） 掌握无菌操作的概念和基本操作技术。 （2） 了解细菌常用培养基以及培养条件 （3） 了解平板划线分离菌种的原理和操作要点 二、实验原理： 微生物的接种技术是微生物学研究中的一项最基本的操作技术。在微生物学的科学试验及发酵生产中，都要把一种微生物移接到另一灭过菌的新鲜培养基中，使其生长繁殖并获得代谢产物。根据不同的接种方法，如斜面接种、液体接种、平板接种、穿刺接种等。接种方法不同，常有不同的接种工具，如接种针、接种环、接种钩、滴管、移液管、涂布器等。接种的菌种都是纯培养的微生物，为了解保纯种不被杂种菌污染，在接种过程中必须进行严格的无菌操作。 三、实验材料： 烧杯 、 玻璃棒、 天平、 电炉、 培养基 、蒸馏水、 接种环 、 培养皿（12个）、 试管（20支）、 高压灭菌锅、 无菌操作台、 酒精灯、 温箱 四、实验步骤： 1、配制培养基：用天平称取琼脂培养基粉末45克，加入100毫升的蒸馏水，用电炉加热直至培养基彻底溶解。 2、分装试管：将溶解的培养基分装入试管，且分装入的培养基应不超过试管高度的三分之一，塞上木塞。 3、灭菌：将装入培养基的试管、培养基与培养皿用报纸包扎好，一起放入高压灭菌锅，126度灭菌15分钟，等冷却后将试管斜放，制成斜面（斜面长度不超过试管长的一半）。 4、制平板培养基：将灭完菌的培养皿与培养基移至无菌操作台，在无菌条件下制成平板培养基，待用。 5、取菌种：（1）每个试管中放入1毫升的生理盐水。分成三组。 （2）用接种环取鱼鳃、身体与尾部的细菌，分别放于1号试管中。 （3）1号试管取一半带菌液体放入2号试管中，振荡，再取一半带菌液体加入3号试管，振荡，取一半液体加入4号试管，振荡。 6、分离细菌：（1）在无菌条件下操作，点燃酒精灯后，左手持皿，底朝下盖朝上，以无名指和小指托底，用拇指、食指和中指将皿盖揭开成20。左右的角度（角度愈小愈好，以免空气中细菌进入皿中将培养基污染）。 （2）右手持接种环于酒精灯上灼烧灭菌，待冷，取带菌液体于平板培养基上划线分离培养。 （3）划线完毕，烧灼接种环，将培养皿盖好，用标签做好标记，倒置，待培养。 7、培养细菌：将培养皿放入37。C温箱中培养。 五、实验结果：培养出多个单菌落。 实验二 细菌的形态学鉴定方法 (一)细菌的形态学观察 一、实验目的： 了解细菌的个体形态和菌落培养特征。 二、实验原理： （一）菌体形态观察 细菌个体微小，观察个体大小、外形、排列、特殊结构时，一般借助普通光学显微镜。 细菌的基本形态可分为三类：球菌、杆菌和螺旋菌。 1、球菌