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桃果实CyPD基因克隆生物信息学分析及蛋白表达 　　摘要：线粒体膜通透性转换孔（MPTP）是线粒体内膜上的一种蛋白复合体，在细胞凋亡或坏死中具有重要作用。亲环蛋白D（CyPD）是MPTP的重要组成蛋白，对线粒体引起的细胞凋亡有重要的调节作用，但植物中该蛋白的研究较少。本试验通过PCR、RACE等分子生物学技术克隆获得了肥城桃果实线粒体CyPD基因cDNA序列，该序列全长663 bp，开放阅读框为615 bp，编码204个氨基酸；系统进化树分析发现，肥城桃CyPD与苹果CyPD蛋白在进化关系上最为亲密；蛋白质三维结构模拟表明，该蛋白含有2个α螺旋、8个β折叠结构；体外构建了pET-32a-CyPD重组表达载体，并成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。这些结果为进一步研究CyPD蛋白的结构和功能奠定了基础。 　　关键词：肥城桃；线粒体；CyPD；基因克隆；蛋白表达 　　中图分类号：S662.1：Q78 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）08-0007-05 　　Abstract Mitochondrial membrane permeability transition pore （MPTP） is a kind of protein complex playing important roles in cell apoptosis and necrosis. Cyclophilin D （CyPD） plays roles in cell mitochondria-mediated apoptosis， which is an important part of MPTP. However， there are fewer researches on CyPD in plants. In this study， the full-length cDNA of CyPD was gained by molecular biology method. It was 663 bp， contained 615 bp of the coding sequence and encoded a polypeptide of 204 amino acids. The recombinant CyPD protein was expressed in Escherichia coli. The phylogentic tree revealed that CyPD was more closely related to apple CyPD protein in evolution. The three-dimensional structure of CyPD showed that the protein contained 2 α-helix and 8 β-pleated sheets. These results would lay a foundation for studying the structure and function of CyPD protein further. 　　Keywords Feicheng peach； Mitochondria； CyPD； Gene clone； Protein expression 　　线粒体是一种具有双层膜结构的半自主细胞器，除具有能量转化、三羧酸循环、氧化磷酸化及?Υ娓评胱拥裙δ芡?[1-5]，还参与细胞凋亡、细胞分化和细胞信息传递等过程[6-8]。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，是自主有序的、多基因严格控制的过程[9]。Bcl-2基因的发现使人们认识到细胞凋亡过程的复杂性[10]，随着对细胞凋亡的深入研究，人们逐步认识到细胞凋亡有三条途径：膜受体途径、内质网途径和线粒体途径[11-13]。 　　线粒体通透性转换孔（MPTP）是线粒体上的一个特殊孔道。MPTP开放被认为是线粒体导致细胞死亡的众多途径中关键的一个，是细胞凋亡的限速步骤[14]。有研究表明，构成MPTP的主要蛋白包括：线粒体腺嘌呤核苷酸转运体（adenine nucleotide translocator，ANT）、亲环蛋白D（cyclophilin D，CyPD）、电压依赖型阴离子通道（voltage dependent anion channel，VDAC）、F0F1-ATP酶（ATP synthase）以及磷酸盐载体（phosphate carrier，PiC）[15，16]。 　　CyPD是CyP蛋白家族的线粒体表型，是一种水溶性蛋白，有207个氨基酸，分子量约为20 kD。CyPD的N端有一段信号序列，使其定位于线粒体基质中，蛋白转运到线粒体后这段序列被切