棘孢木霉对水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌生物防治研究.docVIP

棘孢木霉对水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌生物防治研究 　　摘要：为了检测棘孢木霉T12对立枯丝核菌的生防效果，测定了T12对立枯丝核菌RS02菌株竞争性抑制作用，T12挥发性代谢物对RSO2菌核萌发和菌丝生长的影响，T12的发酵液对tlS02菌核萌发、菌丝干质量和侵染相关酶活力的影响。结果显示，培养4d的T12通过空间竞争对RSO2生长产生抑制，抑制率达78.7%；T12产生的挥发性物质对菌核萌发和菌丝生长抑制率分别为10.3%、12.2%；大于10%浓度T12发酵液对菌核萌发、菌丝干质量均表现出显著或明显的抑制效果，50%浓度发酵液对菌核萌发、菌丝干质量的抑制率分别为65.7%、88.2%；培养5d，10%、30%、50%浓度发酵液处理的tlS02纤维素酶活力分别降低了17.4%、55.0%、76.8%，果胶酶活力分别降低了21.8%、53.9、69.5%。综合试验结果可知，棘孢木霉T12能够显著抑制立枯丝核菌的生长并降低其侵染能力。 　　关键词：立枯丝核菌；菌核；棘孢木霉；生物防治 　　中图分类号：S435.111.4+2 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2015）05-0115-03 　　水稻纹枯病是水稻的重要病害，病原菌立枯丝核菌（Rhi-zoctonia solania Kahn）能够在土壤中存活数年，菌核是其主要的侵染源。水稻秸秆还田为纹枯病的发生提供了大量的病源，同时纹枯病病菌对特效药井冈霉素抗性逐年增加，因此迫切须要寻找新的控制水稻纹枯病的方法。棘孢木霉Trichodermaasperellum12菌株是笔者所在实验室分离的对水稻纹枯病具有生防效果的微生物菌株，由于针对棘孢木霉生防水稻纹枯病的报道较少，因此本研究针对棘孢木霉T.asperellum12菌株对立枯丝核菌生长和侵染能力的影响开展相关研究。 　　1.材料与方法 　　1.1供试菌株与试验材料 　　供试的棘孢木霉Trichodermaasperellum12（T12）菌株从江苏省盐城市的滩涂土壤中分离，通过PDA培养基培养，于4℃保存；水稻纹枯病Rhizoctonia solaniaO2（RS02）菌株由河海大学农业环境研究所提供，通过PDA培养基培养，于4℃保存。水稻品种选用武运粳21号，由江苏中江种业股份有限公司生产。 　　1.2生防菌株T12菌核和发酵液的制备 　　将RS02接种到PDA培养基上，于28℃培养14d，用无菌镊子捏取菌核放置在无菌滤纸上保存备用。取在PDA上培养3d的T12菌落边缘菌饼3块，接种到放置200mL液体PDA培养液的500mL三角瓶中，于28qC、120r/rain培养96h。用无菌棉花和O.45um无菌滤器过滤发酵液，将获得的无菌T12发酵液于4℃保藏备用。 　　1.3生防菌T12对RS02的竞争抑制作用 　　取在PDA上培养3d的T12、RS02菌落边缘的菌饼（直径0.5cm），同时接种到PDA培养基上对峙培养，菌饼之间的距离2cm；以只接种RS02菌饼的培养皿为对照，于28℃培养。每天拍照，通过Photoshop软件测定菌落形成的不规则图形面积，研究T12对RS02生长的影响。 　　1.4生防菌T12挥发性物质对RSO2菌核萌发和菌丝生长的影响 　　在PDA培养基中接种T12菌落边缘的菌饼，分别于28℃培养0、4d。将菌核均匀地接种到水琼脂培养基上，将培养皿倒扣在培养0、4d的T12培养皿上，以未接种T12的空PDA培养基作为对照，培养皿接口处用Parafilm封口膜封口，于28℃培养36h，测定菌核萌发率。 　　在PDA培养基中接种T12、RS02菌落边缘的菌饼，T12分别于28℃培养0、4d，将T12、RS02的2个培养皿倒扣，培养皿接口处用Parafilm封口膜封口，以没有接种T12的培养皿为对照，于28℃培养5d，测定RS02的菌落直径。 　　1.5 　　生防菌T12发酵液对RSO2菌核萌发的影响 　　用T12无菌发酵液、熔解的无菌水琼脂培养基和无菌水混合成培养基，培养基中水琼脂培养基比例相同，发酵液浓度分别设为0、1%、5%、10%、20%、30%、50%，培养基倒入平皿后均匀地接种RS02菌核，每天测定菌核的萌发率。 　　1.6生防菌T12发酵液对RSO2菌丝生长的影响 　　将PDA液体培养基、T12发酵液无菌过滤液和无菌水按照比例混合成培养液，培养液中的PDA比例相同，T12发酵液浓度分别设为0、1%、5%、10%、20%、30%、50%。在250mL三角瓶中放置100mE培养液，接种1块RS02菌饼，于28℃、50r/rain培养5d。用无菌滤纸过滤培养液中形成的菌丝，测定菌丝质量。 　　1.7生防菌T12发酵液对RS02侵染相关酶活力的影响