微生物检验技术-生化鉴定.pdfVIP

微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 １、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其 形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细 胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌 在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到 区别、鉴定微生物的目的。 ２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落 （colony）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的 菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特 征却有一定稳定性。，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。 因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重 要内容。 １）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观 察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽 度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体 培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体 培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。 ２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体， 在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落 大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面 形成菌膜。霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培 养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、 气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心， 正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝 无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状 和蜘蛛网状菌落。 革兰氏染色: 革兰氏染色法是1884 年由丹麦病理学家C.Gram 所创立 + 的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G ） — 和革兰氏阴性菌（G ）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色 法。 + — 该染色法所以能将细菌分为G 菌和G 菌，是由这两类菌 — 的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G 菌的细胞壁中含有较 多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故 用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性， 使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色， + 再经蕃红复染后就成红色。G 菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度 高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩 小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色 步骤： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）晾干：与简单染色法相同。 （3）固定，与简单染色法相同 （4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量 （以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1 分钟。 （5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 （6）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。 （7）水洗：用水洗去碘液。 （8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s 至 流出液无色，立即水洗。 （9）复染：滴加蕃红复染5min。 （10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 （11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。 （12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察， 并判断菌体的革兰氏染色反应性。 （13）实验完毕后的处理： ①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸 将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头 擦2—3 次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3 次。注 意擦镜头时向一个方向擦拭。 ②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干 Aseptic technique: Streak plate: Pour plate Spread plate The method of a serial dilutions for viable counting 二、生理生化试验