应用滤袋技术测定中性洗涤纤维（NDF）的方法.docVIP

应用滤袋技术测定中性洗涤纤维（NDF）的方法 Ringbio纤维分析仪 1 范围 本方法规定了饲料中饲料中中性洗涤纤维(NDF) 的测定方法。 本方法适用于各种单一饲料和配合饲料。 本方法不适用于无机盐类饲料添加剂。 2 原理 饲料如一般饲料、牧草和粗纤维在一定温度下，经中性洗涤剂处理，可洗涤分解大部分细胞内容物，如脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等，不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），包括构成细胞壁的半纤维素、纤维素、木质素和少量硅酸盐等杂质。 3 仪器和设备 3.1 消化装置- Ringbio 纤维分析仪。 3.2 滤袋- Ringbio 专用滤袋。 3.3 封口机。 3.4 电热干燥箱。 3.5 高温电阻炉。 3.6 耐溶剂记号笔。 3.7 干燥器：无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂。 3.8 分析天平- 精确至0.1 mg。 4 试剂和溶液 4.1 十二烷基硫酸钠。 4.2 乙二胺四乙酸二钠（EDTA 二钠盐）。 4.3 四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。 4.4 无水磷酸氢二钠。 4.5 三甘醇。 4.6 正辛醇（消泡剂）。 4.7 丙酮。 4.8 α-高温淀粉酶。 4.9 中性洗涤剂（3％十二烷基硫酸钠溶液）：称取60.0 g 十二烷基硫酸钠（USP）；37.22 g 乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）；13.62 g 四硼酸钠（Na2B4O7）十水；9.12 g 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）；20.0 ml 三甘醇；全部溶解在2 L 水中，适当的搅拌和加热有助于溶解。检查适当的pH 在6.9～7.1。 5 测定步骤 5.1 试样 用耐溶剂记号笔给滤袋编号，称重记为m1。准确称取0.5 (± 0.05) g 制备好的样品于滤袋中，记为m。样品需要粉碎过1mm 筛。在距离滤袋上边缘约4mm 处用封口机封口，将样品在滤袋中展平，均匀分布。 至少取一个空滤袋作为空白，记为C，做空白测定。 5.2 预先脱脂 脂肪含量高的样品需要脱脂。将装有样品的滤袋放入玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，浸泡10min，倒掉溶剂，将滤袋放在网筛上凉干。 5.3 放置滤袋 将样品袋放在托盘上，每层托盘可放三个。一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。无论放置滤袋数量多少，8 层滤袋架上的托盘要全部使用，层与层之间错开120°。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，将金属压锤放在支架顶部，以确保消煮过程中不浮起。 5.4 消煮 当处理24 个样品袋时，在消煮缸体内加入1900～2000 mL 已配好的中性洗涤剂溶液。如果处理的样品袋少于20 个，按照每个滤袋加100 mL 溶液，但不能少于1500 mL，要确保滤袋托盘能完全浸没。再向消煮缸体内加入20.0 g 无水亚硫酸钠和4.0 g α-高温淀粉酶。按下HEAT+AGITATE按键，设置处理时间75 min，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100 °C。 5.5 排废 时间到后加热搅拌自动关停，消煮结束，按下EXHAUST按键，排出废液。 *注：消煮器中的溶液是有压力的，在打开盖子之前一定将废液全部排尽以释放压力。 5.6 水洗 溶液排尽后，打开盖子，加2L (70°C~90°C) 的蒸馏水，并且第1次和第2次淋洗时同时加4.0 g α-高温淀粉酶，放下盖子，但不旋紧。按下FLUSH 按键，设置时间为5 min。重复2 次，共淋洗3 次。最后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。 5.7 浸泡丙酮 将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250 mL 烧杯中，加丙酮至浸没滤袋，浸泡3~5 min 后，取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。 5.8 烘干并称重 在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。完全干燥后放入102 °C±2 °C 烘箱中烘干2～4 h。 *注：为避免滤袋燃烧，在丙酮完全挥发前不能把滤袋放入烘箱中。 从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，称重记为m2。 6 结果计算 试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算： 其中： m1——空滤袋质量，g； m——样品质量，g； m2——提取处理后样品残渣质量+滤袋质量，g； C——为空白滤袋校正系数(烘干后质量/原来质量)。 7 安全注意 7.1 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。 7.2 十二烷基硫酸钠对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。