流式荧光技术特点和原理.PDFVIP

流式荧光技术又称液态芯片技术(Luminex xMAP 技术) ，其整和了荧光编码微球、激光分析、 应用流体学及高速数字信号处理等多项最新科技，是美国 Luminex 公司于上世纪末开发出 的新一代高通量发光检测技术。目前该技术已被广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、 受体和配体识别等领域，并得到各权威机构和医学界的高度认可。2005 年，该技术荣获 FrostSullivan 颁发的“年度国际临床诊断技术革新大奖” 。目前，由Luminex 技术平台获得 实验数据发表的科研文献已超过12000 篇。每年有数千篇引用流式荧光技术的文献，其中数 百篇为Pubmed 收录的高质量研究文献。 我国也已有不少厂家将先进的流式荧光技术平台用于临床检验领域高端的体外诊断试剂开 发和生产，如国内的透景生命（股票代码：300642 ）、益善生物及协和洛克等。其中，透景 生命是国内最早引入流式荧光技术的体外诊断试剂公司，也是 Luminex 公司在国内最大的 开发型合作伙伴，在国内最早获得CFDA 批准将流式荧光技术用于临床检验试剂的生产。 流式荧光技术特点及原理 流式荧光平台的突出特点在于其可进行高速高效的多指标联检、既可对蛋白也可对核酸进行 分析、既适用于临床检验也适用于科研、高灵敏度荧光发光可进行定性或定量分析，而且检 测时对样本需求量极少，特别适合一些珍贵样本的多指标分析。此外，平台具有极佳的开放 性和拓展性，用户可根据自己的需求来设计和实现对不同目标分子的联合检测。 该技术是以直径5.6μm （约为头发丝直径的十五分之一）、大小均一的荧光微球作为免疫或 核酸杂交反应的载体，微球表面包被有特异性抗体或核酸探针，可与样本中待检分子特异性 结合。微球经两种荧光染料染色编码，可获得100 种不同特征荧光谱的微球，不同荧光编码 微球连接不同抗体或核酸探针并可在同一反应体系内进行反应。当微球逐颗经过仪器检测 时，检测仪发射红色激光识别微球的荧光编码以确定检测项目类型，发射绿色激光读取待检 物荧光信号强度进行定性或定量分析。直径 5.6μm 的微球具有极大的比表面积，可长时间 悬浮于液体中进行高效均匀的拟液相动力学反应。同一反应体系内不同编码微球各自反应、 互不干扰，从而实现一次检测获得100 种检测结果，实现多指标的高通量联合检测。由于微 球的羧基化表面可与任意蛋白或核酸探针的氨基发生共价交联，因此可根据实验需要对各种 不同蛋白及核酸等目的分子进行检测，或进行新项目的开发及个体化检测试剂的定制。 流式荧光技术的广泛应用 流式荧光技术作为开放型的多功能检测技术平台，在临床诊断检测、新药的高通量筛选以及 生命科学基础研究领域均有重要而广泛的应用： 流式荧光——临床应用多面手 流式荧光技术具有成熟的临床应用，是同时兼顾免疫和核酸检测的双栖检验平台。由于其高 通量的联合检测优势，尤其适合于诸如肿瘤标志物及HPV 基因分型等临床多指标项目的检 测。 肿瘤标志物（TM ）是肿瘤辅助诊断、预后判断、疗效观察和复发检测的重要指标。单个的 TM指标灵敏度和特异性较差，目前临床推荐使用几项合适的TM组合进行联合检测，从而提 高指标的应用价值，如EGTM推荐的肺癌检测黄金组合3项——CYFRA21-1，NSE，CEA。流式 荧光平台尤其适合于肿瘤标志物的多项联合检测。一方面，流式荧光法免疫检测具有与化学 发光法媲美的检测性能：董振南等[1]在对平台上多肿瘤标志物的检测方法学评价中，显示 与化学发光法相关性良好，对AFP 、CYFRA211、CEA及NSE 的检测相关系数分别为0.9760、 0.9268、0.9727及0.8990 。徐京昕等[2]及张玥等[3] 同样进行了TM检测性能验证，流式荧光 平台适合于临床检测推广。北京市体检中心[4]使用流式荧光平台,对当地23 566名健康人群 血清AFP 、CEA进行研究分析,显示出在不同年龄层和性别间的显著差异性,与在化学发光平 台上的检测结果一致。另一方面，流式荧光平台由于其联检优势，检测效率可达化学发光法 的数倍，如涵盖中国85%以上高发恶性肿瘤的精选7项组合检测速度达840T/h，而化学发光 法为200T/h 。此外，平台上的所涵盖的18项TM指标，还可根据用户需要，灵活组合后进行 联合检测。 HPV 是一种常见的嗜上皮性病毒，其型别众多，依据致病能力的不同，分高危型和低危型。 高危型HPV 的持续感染是导致宫颈癌发生的明确