实验7血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳.pptx

目的;原 理;电泳影响因素： 蛋白质在电场中移动的速度取决于蛋白质所带的电荷性质、数量及质点的大小和形状；此外还受外界因素的影响如，电场强度、溶液的PH、离子强度及电渗等。 常见的有： 醋酸纤维膜电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、 毛细管电泳;醋酸纤维薄膜电泳 ;血浆蛋白： (1)清蛋白（Alb）、α1、α2、β、纤维蛋白原和γ-球蛋白 ; (2)血浆中蛋白质的PI小于7.0，在PH8.6 Buffer中解离成负离子，在电场中向正极移动。 （3）在同一pH下所带电荷量多少有差异，各蛋白质的分子大小与分子形状也不相同，因而在同一电场中泳动速度不同 。;染色剂：;白蛋白 a1-球蛋白 a2-球蛋白 β-球蛋白 γ－球蛋白;定量;计算;操 作;2、点样 （1）无光泽面朝上，吸去多余Buffer, （2）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划线 处。 注意：不能超出边缘；不能重复点样；必须与???缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜 。 ;3、平衡： 无光泽面朝下，点样侧位于阴极（5min) 4、电泳： 打开电源，U＝160V或I＝1.6mA t=45－50min；冬季1小时 5、染色：氨基黑10B 染色充分，5－10min 6、漂洗： 3－4个漂洗皿，洗去染料至背景无色。;临床意义 ;血浆蛋白的主要功能 ;肝炎：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、β-球蛋白下降，γ－球蛋白升高 肝硬化：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白下降明显， γ－球蛋白极度升高 肾病综合症：白蛋白降低，α2和β球蛋白升高