禽体中阿奇霉素毒性及药代动力学研究.docVIP

禽体中阿奇霉素毒性及药代动力学研究 　　摘要阿奇霉素(azithromycin)为15元环的半合成大环内酯类抗生素,化学结构是在红霉素的基础上加以改进,在其A酯环的9α位插入一个取代甲基的氮原子,弥补红霉素的结构缺陷,进而改善其药理学性能。主要探讨阿奇霉素在肉鸡中的亚急性毒性、残留检测及药代动力学的消除规律。我们以麻花肉鸡为实验对象,通过测定其血清的生化指标及脏器系数,并进行组织病理学观察来探索阿奇霉素的亚急性毒性;将阿奇霉素以10mg/kg体重的剂量对肉鸡连续灌服7天,然后采用HPLC―紫外法对体内各器官组织进行残留检测;通过对色谱条件的优化、标准曲线的建立及样品测定来研究其药代动力学的消除规律。 　　关键词阿奇霉素;禽体;毒性;残留检测;药代动力学 　　中图分类号R9文献标识码A文章编号1673-9671-(2010)052-0114-01 　　 　　阿奇霉素为15元环半合成氮杂内酯类的第一个制剂,在化学结构上对红霉素进行了修饰和优化,既保持了对革兰氏阳性菌的抗菌活性,又提高了对革兰氏阴性菌的抗菌效果。其代谢物无活性,对大多数耐红霉素杆菌有良好的抗菌效果。但该抗生素也有一些潜在的问题,如细菌产生耐药性、残留时间长、蓄积毒性大等。我们以麻花肉鸡为实验对象,按照新兽药的临床试验要求,分析探索了阿奇霉素在肉鸡中的亚急性毒性、残留检测及药代动力学的消除规律,初步揭示了阿奇霉素在家禽养殖中的应用前景。 　　1材料 　　1.1药品与试剂 　　阿奇霉素(475IU/mg石家庄制药集团华盛制药有限公司);阿奇霉素标准品(946IU/mg中国药品生物制品检定所);阿奇霉素对照品(1000IU/mg,200609101,金华市奥奇生物化学有限公司);丙氨酸氨基转移酶试剂盒(ALT,紫外-乳酸脱氢酶法,上海科华东菱诊断用品有限公司);门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST,连续监测法,上海申索佑福医学诊断用品有限公司)。乙腈、甲醇(色谱纯,上海德正化工有限公司),其余试剂均为分析纯级别。 　　1.2仪器 　　高效液相色谱仪,大连依利特分析仪器有限公司,型号P1201(UV1201紫外-可见检测器、P1201高压恒流泵、EC2006色谱数据处理工作站);显微摄像仪,型号BX50,日本奥林巴斯公司;离心机,型号3K15,德国SIGMA公司;电子天平,型号AB265-S,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;752紫外分光光度计,型号HP289532,美国惠普公司。 　　1.3饲料 　　饲料参照美国国家研究委员会(NRC,1994)营养标准配制加工而成。试验期间试验鸡自由采食全价料,以玉米、豆粕为主。 　　2亚急性毒性试验 　　选用20日龄的健康麻花肉鸡80只,试验前先置于实验动物房笼养适应3天。按照雌雄各半的组成比例,将这80只麻花鸡随机分为一个对照组和三个试验组,每组20只并分笼饲养。对照组给予的饮水为纯净水;试验组在饮水中分别按照0、60、120和240mg/L的剂量加入水溶性阿奇霉素,供试验鸡自由饮用。测定各组的血清学指标及生化指标和肝脏系数,并且进行病理学观察,从而对阿奇霉素的亚急性毒性进行评价。 　　2.1血清采集及生化指标的测定 　　给药期间,每日观察各组鸡的精神状态和食欲情况,并且详细记录采食量、饮水量。待12天的试验期结束,将试验鸡颈静脉放血,取中段血2mL。血液凝固后以3000r/min的速度离心10min,分离出血清,依照试剂盒说明书上载明的方法,分别采用紫外-乳酸脱氢酶法和连续监测法对丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性进行测定。 　　试验结果:基于80份样品的测定结果及统计软件的分析,结果表明,低剂量阿奇霉素对鸡ALT和AST活性的影响没有显著的差异;但中、高剂量组的ALT活性与对照组存在明显的差异。 　　2.2脏器系数测定及组织病理学观察 　　将试验鸡放血处死,迅速进行解剖并取出心脏、肝、脾、肾等内脏器官,除去其上附着的脂肪和筋膜,称重,然后经计算得出各脏器的脏器系数(脏器系数=脏器重量/体重×100%)。称重后的脏器,经固定液固定24小时,脱水后石蜡包埋,切片并进行HE染色,显微镜下观察。 　　试验结果:低剂量组及中剂量组的鸡脏器无明显眼观病变,高剂量组鸡肝表面出现黄斑、肿大、出血点;关于脏器系数,中、低剂量组与对照组无显著性差异,而高剂量组的鸡出现肝的脏器系数显著增大。 　　3残留检测 　　阿奇霉素在波长210nm处有较强的吸收,适合用反相高效液相色谱法来分析,这也是目前国际上认可度比较高的检测方法,已被许多国家的权威检测机构采用。我们的研究表明,运用反相高效液相色谱法可以得到的最低检出量为0.05μg/mL,这比国