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石榴蜜中多酚类成分测定及其抗氧化活性研究 　　摘要：利用固相萃取-高效液相色谱研究了6个石榴蜜样品中多酚类成分含量，以及石榴蜜对DPPH 自由基的清除作用，通过ORAC法测定其抗氧化能力，并对其还原力进行测定。结果表明，石榴蜜的总酚含量在 29.28～37.25 mg/100 g 之间，总黄酮含量在 2.31～2.47 mg/100g，其中酚酸含量较高的样品1和样品2抗氧化能力较强。石榴蜜各样本中均含脱落酸、木樨草素及芹菜素3种酚类化合物。同时，所有石榴蜜样品均具有一定的抗氧化活性，与总酚含量呈现量效关系，呈正相关。 　　关键词：石榴蜜；总酚；总黄酮；抗氧化活性 　　中图分类号： S896.1；R284.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）08-0179-04 　　蜂蜜是指蜜蜂采集蜜源植物的花蜜、分泌物或蜜露，并与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质[1]，是公认的具有多种生物学活性的天然食品[2]。近年来对蜂蜜的研究主要集中在各种活性成分及抗氧化等活性能力方面。多酚类成分是蜂蜜中的重要活性物质之一，包括黄酮、单宁、酚酸及其衍生物等[3]。酚酸是蜂蜜中的主要多酚类化合物，具有抗氧化等多种保健功能[4]。黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗炎[5]等生物学活性。由于蜂蜜蜜源植物的不同，蜂蜜中的酚酸和黄酮类化合物的含量和种类也有很大差异。 　　石榴树（Punica granatum L.）为石榴蜜蜜源，是桃金娘目石榴科石榴属多年生落叶乔木或灌木。石榴在全国部分地区有分布，可食用的名品有安徽淮北百子糖石榴、山东枣庄软子石榴、陕西临潼石榴、广西胭脂红石榴、四川青皮石榴以及云南蒙自青壳石榴等。云南省地理气候特征独特又复杂，区域差异非常明显，在此条件下孕育出了极其丰富的蜜源植物。云南省一年四季如春，花开不断，养蜂条件优越，出产的蜂蜜品种较多，但关于该地区石榴蜜中酚酸、黄酮类化合物含量的报道较少。本研究测定 6 个云南石榴蜜样品中多酚类成分的含量，并对其抗氧化活性进行研究，旨在发现石榴蜜的保健功能，以期为开发云南的特色蜂蜜提供一定的理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料与试剂 　　1.1.1样品6个石榴蜜样品均为2015年产自云南省，1、2号蜜样采自蒙自县；3、4号蜜样采自巧家县；5、6号蜜样采自建水。样品采集后均置于4 ℃冰箱保存。 　　1.1.2?剂三氯化铁、三氯乙酸、铁氰化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、亚硝酸钠、邻苯三酚、碳酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、鲁米诺等均为分析纯，均购自北京化学试剂公司；1，1-二苯基-2-苦基苯肼DPPH，荧光素钠（sodium fluorescein），6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchr- oman-2-carboxylic acid trolox，2，2，-azobis（2-methylpropionamidine） dihydrochloride ABAP均购自美国Sigma公司；甲醇购自美国Fisher公司；没食子酸（98%）、脱落酸、芸香苷对照品购自上海佳和生物科技有限公司；木樨草素、芹菜素购自四川成都生物技术有限公司；乙酸购自J.T Baker公司；Strata-X-A固相萃取柱（60 mg/3 mL）购自广州菲罗门科学仪器有限公司。 　　1.1.3主要仪器与设备微量移液器，购自德国Eppendorf公司；AL204型分析天平，购自梅特勒-托利多仪器有限公司；SHB-Ⅲ循环水式真空泵，购自长城科工贸有限公司；DZF-6090型真空干燥箱，购自科学仪器有限公司；超纯水系统，购自Merk Millipore公司；KQ-50DB型数控超声波清洗器，购自超声仪器有限公司；HZS-H型水浴摇床，购自东明医疗仪器厂；24孔固相萃取装置，购自美国Supelco公司；恒温水浴氮吹仪，购自北京科林工贸有限公司；SY21-K型电热恒温水浴锅，购自北京长风仪器仪表公司；Synergy TM HT型多功能酶标仪，购自美国Bio-tek公司；LC-6AD高效液相色谱仪，购自日本岛津公司。 　　1.2方法 　　1.2.1蜂蜜提取液的制备在Dimitrova和孙春丽研究[6-7]的基础上进行了改进，具体步骤如下：（1） 对固相萃取柱预处理，用3 mL甲醇进行活化，用3 mL pH值=7的超纯水进行平衡；（2） 称取蜂蜜样品30 g，用120 mL超纯水稀释，玻璃棒搅拌至蜂蜜完全溶解。然后用氨水调节至pH值=7，8 000 g离心除去固体不溶物，取上清液倒入处理好的固相萃取柱中。上样结束后，用3 mL的超纯水 （pH值=7） 清洗，然后用 5 mL 甲酸甲醇 （5 ∶95，V/V） 溶液进行洗脱。将洗脱液在 45 ℃ 恒温水浴中用氮吹至干