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红颜草莓离体培养与快速繁殖 　　摘要：以红颜草莓的茎尖作为外植体，研究了外植体的消毒方法、激素组合对其离体培养与快速繁殖的影响。结果表明，幼茎段在0.1%氯化汞+3滴吐温-80溶液中浸泡5 min灭菌效果最好；茎尖以0.35 mm大小为宜；诱导丛生芽的最适培养基为：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA；诱导试管苗生根的最适培养基为：1/2MS+0.1 mg/L IBA。 　　关键词：草莓；离体培养；不定芽；快速繁殖 　　中图分类号： S668.404+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）11-0066-03 　　收稿日期：2015-04-14 　　基金项目：2014年江苏省农业三新工程（编号：SXGC[2014]141）。 　　作者简介：李慧（1971―），女，江苏宿迁人，硕士，教授，主要从事园艺作物的组织培养研究。E-mail：lihui710623@163.com。红颜又称日本99、红颊，是日本静冈县用章姬与幸香杂交育成的早熟草莓栽培品种。叶片大、新茎分枝多，结果能力强，果实品质好，果粒个大，果形、果色、价格明显优于丰香草莓。是春节前后集采摘、鲜食为一体的休闲旅游消费农产品，深受广大果农和顾客的喜爱。但是，红颜草莓苗不抗白粉病，不易育苗，幼苗一旦染病，几天内将全军覆没。因此，试管苗的繁育将有很大的市场前景。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　试验于2014年12月至2015年4月进行。供试材料红颜草莓苗引自淮安怡园果蔬种植专业合作社（实生苗2014年9月栽植在江苏联合职业技术学院淮安生物工程分院花卉实训中心的无土栽培槽内）。 　　1.2试验方法 　　1.2.1表面灭菌试验于晴天的下午取供试红颜草莓刚抽出的匍匐茎的幼茎段（母株要健壮、无病），流水冲洗泥土、灰尘。在无菌条件下，先用75%乙醇浸泡20～30 s，无菌水冲洗3～4次，再转入0.1%氯化汞溶液+2滴吐温-80分别浸泡8、5、4、2 min，无菌水冲洗5～8次。在以上的过程中要不断摇动，以去除附在外植体表面的气泡。用消毒滤纸吸干水珠后，将茎尖接种于诱导培养基中，调整pH值至5.6～5.8。每个灭菌处理各接种50瓶，1个外植体/瓶，20 d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。 　　1.2.2茎尖分化能力试验取“1.2.1”节试验最佳处理，在双目显微解剖镜下剥去苞片和幼叶，将茎尖接种于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基中[1]。接种外植体1个/瓶，30 d后观察记录茎尖分化情况。 　　1.2.3芽诱导试验取“1.2.2”节试验中最佳的茎尖剥制处理分别接种于以0.5 mg/L 6-BA为基础的附加不同种类生长素（0.2 mg/L）配成的培养基、以0.2 mg/L NAA为基础的附加不同种类生长素及细胞分裂素（0.5 mg/L）配成的培养基中[2]，每个处理各接种30瓶，1个外植体/瓶，30 d后开始调查记录幼芽分化情况。 　　1.2.4继代培养与扩大繁殖将长至1～2 cm的丛生芽每4～6株切成1块，转入不同浓度配比的6-BA和NAA配成的继代培养基中。每种处理接种20瓶，4块/瓶，培养20 d后统计每瓶幼苗数量，并计算出增殖率。 　　1.2.5根诱导试验用1/2MS附加不同浓度（mg/L）IBA，有0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L及不加IBA的5个处理，接入幼苗3周后观察记录根的生长情况。 　　培养基均加3%蔗糖，在1.0～1.1大气压下热压灭菌20 min。培养温度（25±2） ℃。每日光照12 h，光照度2 000 lx 。 　　2结果与分析 　　2.1不同消毒剂对红颜幼茎灭菌的效果 　　在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10%水溶液（含有效氯0.4%～0.5%），浸泡接种材料10～15 min；次氯酸钙（漂白粉），用其饱和上清液，浸泡接种材料15～30 min；过氧化氢10%～12%水溶液，浸泡10～20 min ；新洁尔灭5%～10%水溶液，浸泡10～15 min；氯化汞0.1%水溶液，浸泡8～10 min。其中，前4种灭菌剂对接种材料比较安全，不会使活组织中毒死亡，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，影响培养效果。氯化汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。即使在氯化汞处理完后，用无菌水冲洗7～8次，仍然有少量残留在外植体上，导致外植体死亡。 　　用0.1%氯化汞溶液浸泡处理5 min，外植体染菌率为0，成活率为78%；4 min浸泡茎段，外植体总染菌率为18%，死亡7个；当茎段浸泡2 min后，外植体死亡数为3个，但总染菌率高达56%（表1）。 　　观察中发现4种