嗜热菌AnoxybacillusspDL3产蛋白酶条件及其酶-现代生物医学进展.PDFVIP

现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.13 NO.29 OCT.2013 5619 嗜热菌Anoxybacillus sp.DL3 产蛋白酶条件及其酶学性质研究* 1 1 2 3 1 1 李旭颖 应长青 洪 心 邢 燕 齐舒雅 冯 硕 (1 150081 2 150036 哈尔滨医科大学公共卫生学院 黑龙江哈尔滨 ；黑龙江省医院检验科 黑龙江哈尔滨 ； 3 哈尔滨医科大学附属第一临床医院 黑龙江哈尔滨150001) ： Anoxybacillus sp .DL3 ，为下一步进行蛋白酶基因的克隆、表达提供依据。 摘要 目的 对 的产蛋白酶条件及其酶学性质进行研究 pH ： ，研究温度、 ，硫酸铵盐析的方法提纯酶液，并 方法 应用常规方法液体培养细菌 、培养基中碳源、氮源对菌株产蛋白酶的影响 采用Folin 法测酶活性。用紫外分光光度计在OD680 nm 测吸光值。并对提取的蛋白酶液进行酶的最适温度、pH 以及酶的热稳定 pH EDTA PMSF 。 pH 6.5 性和 稳定性研究，向酶液中添加金属离子和 、 ，研究其对酶活性的影响 结果：在培养基初始 是 ，培养温度 为40 ℃时菌株产酶酶活性最大；培养基中以乳糖为碳源，酵母膏和硫酸铵为氮源，碳源与氮源的比例为1:2 时，酶活最大。酶学性 55℃ pH 7.0 50 ℃ 20 min~80min 。60 ℃ 质研究结果显示：该酶的最适反应温度是 ，最适反应 是 ；在 保温 内，酶活力下降幅度较小 60min 仍保持 60% 。70 ℃ 60 min 30 % pH 6.0～8.0 ，相对酶活差别不是 保温 后， 的酶活 保温 后，残余酶活为 。该酶在 为 范围内 Fe2+ Cu2+ Hg2+ Ca2+ Mg2+ Mn2+ 很大，下降趋势大致相同。在强碱条件下，相对酶活下降很明显。 、 和 对酶活性有明显的抑制作用； 、 、 EDTA PMSF 金属离子对酶活性有明显的促进作用；乙二胺四乙酸 （