土豆及其制品中α.docVIP

附件1 土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定 BJS 201806 范围 本方法规定了土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的测定。 原理 样品经酸化乙腈提取，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用外标法定量。 试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水应为符合GB/T 6682规定的一级水。 试剂 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 甲酸（HCOOH）：色谱纯。 甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。 无水硫酸镁（MgSO4）：分析纯。 无水乙酸钠（CH3COONa）：分析纯。 试剂配制 甲酸-甲酸铵缓冲溶液：称取甲酸铵（3.1.4）0.063 g于烧杯中，加适量水溶解后转移到1000 mL容量瓶中，再移取甲酸（3.1.3）1 mL于同一容量瓶中，加水定容至刻度。 酸化乙腈：移取甲酸（3.1.3）10 mL于1000 mL容量瓶中，加乙腈（3.1.2）定容至刻度。 甲醇水溶液（50%，体积分数）：移取甲醇（3.1.1）500 mL于1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度。 标准品 α-茄碱和α-卡茄碱标准品的英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1。 标准溶液配制 α-茄碱和α-卡茄碱混合标准储备液（2.50 mg/mL）：分别准确称取α-茄碱和α-卡茄碱标准品（3.3）各5.00 mg于同一烧杯中，加入少量乙腈（3.1.3）溶解后转移至20.0 mL容量瓶中，加入乙腈并定容至刻度，制成浓度为2.50 mg/mL的混合标准使用液，于﹣20 ℃冰箱中保存，有效期3个月。 仪器和设备 液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI源）； 涡旋混合器； 高速冷冻离心机：转速≥10000 r/min； 电子天平：感量分别为0.001 g和0.00001g； 均质器； 具塞离心管：50 mL和15 mL。 试样制备与保存 用均质器将样品充分打碎混匀，放入分装容器中，密封并标记，于﹣20o℃以下冷冻存放。 测定步骤 提取和净化 称取试样1 g（精确至0.001 g）于50 mL具塞离心管中，加入5.0 mL水涡旋混匀1 min，再准确加入25.0 mL酸化乙腈（3.2.2），涡旋混匀3 min。之后，向离心管中加入2.0 g 无水硫酸镁（3.1.5），1.0 g 无水醋酸钠（3.1.6）。手动剧烈摇动30 s后涡旋混匀1 min。再将离心管置于离心机中，在4 ℃条件下以10000 r/min的速度，离心8 min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入酸化乙腈（3.2.2）至刻度，再从中取25 μL上清液于5 mL容量瓶中，加入甲醇水溶液（3.2.3）至刻度，取1 mL过微孔滤膜（0.22μm，聚四氟乙烯）后上机测定。 仪器测定 液相色谱-串联质谱检测 液相色谱参考条件 a）色谱柱：C18液相色谱柱，100 mm × 2.1 mm，粒径 1.8 μm，或性能相当者； b）流动相：A为甲酸-甲酸铵缓冲溶液（3.2.1），B为乙腈（3.1.2）。梯度洗脱程序见表1； c）流速：0.3 mL/min； d）柱温：35 ℃； e）进样量：5 μL。 表1 梯度洗脱程序 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 95 5 0.1 95 5 3 5 95 4 5 95 4.5 95 5 7 95 5 质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源（ESI）； b）监测方式：多反应监测（MRM）； c）扫描方式：正离子模式； d）毛细管电压：3 kV； e）脱溶剂气温度：500 ℃； f）脱溶剂气流速：1000 L/h； g）锥孔气流速：50 L/h。 目标物的定性离子、定量离子及其碰撞能量等参数见表2。 表2 质谱参数 化合物 母离子（m/z） 锥孔电压（V） 子离子（m/z） 碰撞电压（eV） α-茄碱 869.0 100 97.9* 86 398.4 70 α-卡茄碱 853.0 100 97.9* 90 398.4 70 注：*为定量离子 定性测定 在相同试验条件下测定试样和加标试样溶液，记录试样和加标试样溶液中目标物的色谱保留时间，以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子的相对离子丰度。若试样中检出与加标试样溶液（6.2.3）中目标物保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），且其定性离子对与加标试样溶液中相应的定性离子对的相对丰度（k）相比，偏差不超过表3规定的范围，则可以确定试样中检出相应目标物成分。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 k50% 50%≥k20% 20%≥k10% k≤10% 允许的相对偏差（%） ±20 ±25 ±30 ±50 定量测定 分别称取1