北方粳稻dna指纹图谱的构建-食品科学与工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Classified Index: TS210.7 U.D.C: 63 Dissertation for the Master Degree in Engineering CONSTRUCTION OF DNA FINGERPRINT OF NORTHERN JAPONICA RICE Candidate： Li Xisheng Supervisor： Prof. Ma Ying Academic Degree Applied for： Master of Engineering Speciality： Food Science and Engineering Affiliation： School of Food Science and Engineering Date of Defence： June, 2014 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 摘 要 北方粳稻食用品质优良，商业价值巨大，深受人们的欢迎。近年来，稻米 的掺假现象不断发生，但由于稻米掺假检测手段的缺失，无法对稻米真伪进行 识别。本研究通过建立适用于北方粳稻品种的扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）分子标记体系，构建了北方粳稻的 DNA 指纹数据库，同时设计了可用于北方粳稻品种查询与识别的数据库系统，为进 一步开发北方粳稻品种识别的系统平台奠定基础。 本研究对 DNA 提取方法进行改进，直接从稻米干粉中提取到满足 AFLP 实验要求的粳稻基因组 DNA。根据限制性内切酶组合的选取并且对 64 对选择 性引物组合的筛选，确立了以 EcoRⅠ与 MseⅠ限制性内切酶作为 AFLP 体系的 酶切组合，并筛选得到 8 对多态性高、扩增条带清晰的多态性引物组合，用于 大规模构建粳稻 DNA 指纹图谱库。 根据所建立的 AFLP 分析体系，对 70 个粳稻基因组 DNA 进行指纹图谱的 构建。通过对 DNA 指纹数据的分析，统计多态性条带数目与特异性位点情况： 8 对多态性引物对 70 个粳稻样品共扩增出 1451 条带，且全部为多态性位点， 每对引物组合产生多态性位点数目不等，其中 E4/M3 最多为 193 个，E4/M6 最 少为 147 个，平均扩增 181.4 个，并且 70 个稻米样品中 64 个粳稻样品具有特 异性位点，揭示了不同粳稻 DNA 指纹的多样性。 基于 DNA 指纹数据，对 70 个粳稻品种进行遗传相似性分析，结合粳稻的 遗传背景及系谱图，对 AFLP 分子标记产生的聚类结果进行比较。结果表明： 部分粳稻样品聚类分析结果与理论的遗传背景信息有一定偏差，但总体上，利 用 AFLP 分子标记手段可以揭示不同品种粳稻的亲缘关系，能够区分开不同亲 缘关系的粳稻品种。 根据 70 个北方粳稻的 DNA 指纹图谱数据，基于 Microsoft Office Access 对 70 个北方粳稻 DNA 指纹数据库进行构建。该数据库可用于粳稻 DNA 指纹数据 的管理，查询与维护。为借助 Internet 技术进行数据的共享以及开发一套基于 DNA 指纹信息来识别粳稻品种的计算机功能平台，设计一套北方粳稻品种识别 数据库系统。根据功能需求分析，设计包括用户管理，北方粳稻 DNA 指纹数 据管理，粳稻 DNA 指纹查询与粳稻品种识别分析四个功能模块，同时设计了 该系统的 UI 界面设计图，为下一步软件开发人员实现该数据库系统奠定基础。 关键词：粳稻；DNA 提取；AFLP；DNA 指纹图谱；数据库 I - Abstract Northern japonica rice‘s eating quality is excellent and commercial value is huge. Northern japonica rice is favored by consumers. So it has a higher price in the domestic market. But in recent years, the adulteration of rice occurs frequently. Given the lack of research on detection technology of rice adulteration, the authenticity of rice could not be identified. This study established amplified fra