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肠病及肺微生态学研究 　　摘要：目的：采用微生态学的研究方法探讨“肠病及肺”的机理。方法：建立大鼠便秘模型，观察其结肠和肺部微生态变化。结果：便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多（P0.01），而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少（P0.01）；同时，便秘模型组的肺部需氧菌增多，厌氧菌显著减少（P0.05），真菌显著增多（P0.01）。结论：肺肠微生态学上的菌群对应规律性变化可能是“肠病及肺”的机制之一。 　　关键词：肺与大肠相表里；肠病及肺；便秘；微生态学 　　中图分类号：R37文献标识码：A 　　文章编号：1007-2349（2011）03-0054-02 　　“肺与大肠相表里”的理论源于《内经》，肺与大肠不仅在生理上相互联系，病理上相互影响，治疗上也相互为用（肺病治肠、肠病治肺、肺肠合治）。笔者参照文献［1］方法，建立大鼠便秘模型，并对结肠和肺组织进行微生态学观察，研究‘肠病及肺’的生物学机制。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物SPF级Wistar雄性大鼠40只，体重（180±20）g，购自成都达硕生物科技有限公司（动物合格证号：scxk（m）2008-15），标准饲料喂养。 　　1.2药物及试剂复方地芬诺酯片（DC）（批号焦作博爱药业）；阿拉伯树胶粉（进口分装）（炭粉液的配制：阿拉伯树胶50g，加水400mL煮沸至溶液透明，称取活性碳末25g，加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容至500mL，于4℃冰箱保存，临用前摇匀）。 　　1.3主要仪器及设备ACS-3C型电子天平（广州）；BL-420F型生物机能实验系统（成都）；OLYMPUSBX60光学显微镜（日本）；OLYMPUSDP70彩色图文系统（日本）。 　　1.4大鼠便秘模型制作予复方地芬诺酯片灌胃，剂量10mg/kg，1次/日，30min后再灌炭粉指示液，造模后记录大鼠排出首粒黑便的时间和在6h内排出粪便的粒数及重量，共1周。 　　1.5肺肠微生态学检测收集支气管肺泡灌洗液进行肺部细菌检测，支气管肺泡灌洗液收集方法：大鼠麻醉后，取仰卧位，固定架上固定，打开胸腔，暴露气管，V型切口切开，插管，用0.02%PBS灌洗肺脏5～6次，收集灌洗液，以1500r/min离心5min，取上清液4℃保存待测。取新鲜的粪便1粒即刻放入制备好的转移液中，做菌群的培养、计数和种类鉴别观察。转移液的制备及具体检测程序参照文献［2］进行。 　　1.6统计学方法实验数据以（?Ax-G?±s）形式表示，采用SPSS16.0统计软件包进行分析，行组间配对t检验，以P0.05为有统计学意义。 　　2结果 　　2.1大鼠DC便秘模型的复制实验观察发现，模型大鼠的一般生物学特征为，不同程度出现腹胀状态，懒动、少食，倦怠蜷缩，被毛蓬松无泽，活动减少，反应迟缓，体重明显减轻，摄食量减少。解便次数减少，排便较对照组困难，粪便的外观明显变小，质地干硬，粒数减少、干湿重量均减轻（P0.05），表明造模成功，见表1。 　　病理切片[KG-*3]HE染色光镜观察发现，正常对照组大鼠结肠黏膜完好，无炎细胞浸润及溃疡形成，黏膜上皮完整、连续，腺体排列规则，结构清楚；便秘模型组大鼠结肠表现为局部充血、水肿、黏膜轻度糜烂；结肠黏膜上皮欠完整，腺体排列欠规则，黏膜腺体破坏，残存的黏膜充血、水肿，黏膜及黏膜下大量炎细胞浸润。 　　2.2大鼠肠道菌群检测结果观察结肠微生态的变化，结果显示，便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多（P0.01），而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少（P0.01）。见表2。 　　2.3大鼠肺部菌群检测结果便秘模型组的肺部需氧菌增多，但无统计学意义，厌氧菌显著减少（P0.05），真菌显著增多（P0.01）。见表3。 　　3讨论 　　“肺与大肠表里”理论起源于《黄帝内经》，《灵枢#8226;本输》云：“肺合大肠，大肠者，传导之府”。肺与大肠脏腑相表里，经脉相互属络。在生理学中，传统上认为肺是呼吸器官，大肠是消化器官，二者的活动均由神经-内分泌系统调节控制，没有直接的关联。随着现代研究对肺的非呼吸功能、肠的非消化吸收功能的揭示，二者之间直接联系的途径不断被发现，并日益变得复杂。以往的实验研究，侧重于“肺病及肠”［3~4］，对“肠病及肺”研究较少，因而研究“肠病及肺”的生物学机制有重要意义。 　　观察发现，便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多，而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少；同时，便秘模型组的肺部需氧菌增多，厌氧菌显著减少，真菌显著增多。说明便秘模型大鼠在“肠病”的时候，其肠道菌群出现紊乱，同时，这一病理状态导致了肺部的微生态也随之发生了变化，各种类型的菌群与正常对照组比较发