杂交瘤制备单克隆抗体流程.PDFVIP

活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 杂交瘤制备单克隆抗体实验流程 相关服务 ：单克隆抗体制备服务 利用杂交瘤制备单克隆抗体通常操作流程为 ：抗原制备、用抗原免疫动物、取免疫动物的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融 合成杂交瘤细胞、对杂交瘤细胞进行筛选及克隆化、利用筛选得到的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的大量生产。 抗原制备 用于制备单克隆抗体的抗原纯度越高 ，单抗制备实验的成功率越高。一 般来说 ，抗原可以是蛋白 （天然蛋白或重组蛋白 ）、多肽、小分子等。 免疫动物 免疫动物的选择 通常 ，根据所用的骨髓瘤细胞可选用小鼠或大鼠作为免疫动物。因为 ， 所有的供杂交瘤技术用的小鼠骨髓瘤细胞系均来源于 BALB/c 小鼠 ，所 有的大鼠骨髓瘤细胞都来源于 LOU/c 大鼠 ，所以一般的杂交瘤生产都 是用这两种纯系动物作为免疫动物。就小鼠而言 ，一般选用 6-8周龄雌 性 Balb/c 小鼠。 制定免疫方案 免疫方案应根据抗原的特性不同而定 ，选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功 ，获得高质量的 McAb至关重 要。没有一个免疫程序能适用于各种抗原 ，在设计免疫程序时 ，应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、 免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。现用的免疫程序与多克隆抗体制备的方法类似 ， 免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射等。 表 1列举了目前常用的免疫程序 Tel:(025) 5889-4959 www.DetaiB Sales@DetaiB 活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 单抗的特性 免疫原特性 抗原量 接种次数及间隔时间 抗体滴度 亲和性 6 7 免疫源性强 （如细胞、 10 -10 个细胞 2-4 次 ，每次间隔 2-4 周 高 中等至强 细菌或病毒等 ） 或 1-10ug 免疫源性中等 10-100ug 2-4 次 ，每次间隔 2-4 周 中等或高 中等或强 先 2-4 次免疫 ，每次间隔一个月 ；然 20-400ug 中等 强 后 2-3次免疫 ，每次间隔 2-3月 10-50ug 先 2次剂量 A ，每次间隔 1个月 ；再 后 中等 中等 免疫源性弱 4 次剂量 B ，每次间隔 1天 200-400ug 先 2次免疫 ，每次间隔 1个月 ；再 4 10-100ug 次免疫 ，每次间隔 10 天 ；然后 “休 中等 中等或强 息”1-