烟草幼苗的组织培养.PDFVIP

烟草幼苗的组织培养 一、目的与要求 掌握植物组织培养中无菌操作技术 学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法 二、 实验原理 植物组织培养 在无菌条件下，将植物体的一部分细胞、组织、器 官切割下来，接种到营养介质上，使其增殖成一群细胞、组织、器官， 甚至完整植物体的实验技术。 植物细胞全能性 植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适 当条件下具有繁殖出完整植株的能力。 脱分化 已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性 细胞的过程。 再分化 经过退分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细 胞、组织、器官或完整植物体。 改变生长素NAA和细胞分裂素6-BA浓度比例，可以决定烟草幼苗从 叶片直接分化生成根或芽。 2 ，4-D能够诱导生成愈伤组织。 三、材料和用具  材料：烟草幼苗  器具：超净工作台 高压灭菌锅 光照培养箱 三角烧瓶等  试剂：MS培养基 NAA 6-BA 2 ，4-D 诱导培养基配制 成 分 终浓度要求 用 量 ① 大量元素 （10 ×） 10% ② 蒸馏水 （3/4总体积） ③ 微量元素 （100 ×） 1% ④ 有机成分 （100 ×） 1% ⑤ 铁盐 （100 ×） 1% ⑥ 蔗糖 3% ⑦ 加蒸馏水粗略定容 ⑧ 激素(0.1mg/ml) 3个实验组 ⑨ 调pH 5.8 分30ml/瓶 （组号、激素比例） ⑩ 琼脂 0.8% Step1 : 配大瓶培养基(无激素) 500 ml Step 2: 分瓶,加激素, 调PH=5.8 125ml ctrl NAA:6-BA=1:5 NAA:6-BA=5:1 2,4-D Step 3:分装,加琼脂 30ml 四、操作步骤 1.灭菌： (1)器具灭菌： 剪、镊、培养皿，诱导培养基， 120℃ ，高压灭菌15-20min ； (2) 无菌间和超净台: 紫外灯照射30min ； (3) 清洗手和手腕 ； (4) 关掉无菌间棚顶及超净工作台上的紫外灯，打开超净台风机，用70%酒精灭 喷手； (5) 坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手、培养基瓶和超净台面； (6) 点燃酒精灯。 四、操作步骤 2. 接种 ① 将装有培养基的三角烧瓶橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道 侧面。 ② 将镊子、剪刀在酒精灯外焰上灼烧，待其冷却后、剪取烟草叶。 ③ 取下封