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聊城地区手足口病病原构成临床研究 　　[摘要] 目的 探讨聊城地区手足口病（HFMD）的病原构成及临床特点。 方法 采集2010年6月聊城地区240例HFMD患者（包括23例重症患者）咽拭子并提取病毒RNA。采用real-time RT-PCR方法，以肠道病毒5′UTR区通用引物及探针对病毒RNA进行初步筛查，初筛阳性标本进一步采用CA16及EV71 VP1区特异性引物及探针进行型别鉴定。 结果 普通患者EV71阳性143例、CA16阳性6例、其他肠道病毒阳性21例；重症患者中EV71阳性率达82.6%（19/23），CA16感染未见引起重症。 结论 聊城地区HFMD患者以1～3岁儿童为主，男性高发于女性，农村高发于城市；HFMD的病原包括EV71、CA16及其他肠道病毒，主要病原为EV71，且EV71感染容易引起重症并发症。 　　[关键词] 手足口病；柯萨奇病毒；肠道病毒 　　[中图分类号] R512.5 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2014）01（a）-0163-03 　　手足口病（hand foot mouth disease，HFMD）是由肠道病毒引起的急性传染病，常发生于学龄前儿童，以3岁儿童的发病率最高，表现为发热和手、足、口腔、臀、膝等部位的皮疹、斑丘疹，少数病例可出现无菌性脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等并发症，个别出现脊髓灰质炎样麻痹后遗症，甚至死亡。肠道病毒为HFMD病原，主要为柯萨奇病毒（Coxsackie virus）A组部分血清型，如A2、A4、A5、A8、A10、A16；部分B组柯萨奇病毒血清型，如B2、B4；埃可病毒（ECHO virus）和肠道病毒（enterovirus）71型，以CA16和EV71型常见。为了解本地区HFMD病原构成及临床特点，本研究采集一定时期HFMD患者鼻咽拭子进行了real-time RT-PCR检测，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2010年6月1～9日聊城市人民医院HFMD门诊依据原卫生部《手足口病诊疗指南2010年版》诊断为HFMD的240例患者，其中，男143例，女97例；年龄6个月～40岁（8、12、14、33、40岁各1例），平均3.2岁。轻型患者217例，重症（并发脑炎、脑脊髓炎、脑膜炎、肺水肿、循环衰竭及心肌炎即为重症）患者23例；并发脑炎7例，并发脑炎、肺炎11例，并发肺炎1例；农村178例，城市62例。 　　1.2 标本采集 　　由专业医护人员用专用采样棉签，适度用力拭采咽后壁和两侧扁桃体部位，避免触及舌部，迅速将采样棉签放入装有保存液的外螺旋盖采样管中，旋紧管盖，密封以防止干燥，在采样管外注明标本唯一性编号。2 h内送达实验室，超低温（-80℃）冷冻保存。采集鼻咽拭子置病毒保存液中，送实验室由专业人员严格按操作程序检测。 　　1.3 标本检测 　　咽拭子于标本保存液中充分振荡20 min，洗下拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，冻融1次使细胞破裂，释放病毒颗粒，并在4℃条件下10 000 r/min离心20 min。采用北京金豪制药股份有限公司（简称“北京金豪”）生产的核酸分离试剂盒（硅胶膜吸附法），按试剂盒说明书提取病毒RNA。所得RNA首先应用针对肠道病毒5′UTR区的肠道病毒通用引物荧光检测试剂盒（北京金豪）进行real time RT-PCR检测，阳性标本再以分别针对EV71和CA16 VP1基因的肠道病毒EV71和CA16型双通道荧光检测试剂盒（北京金豪）进行型别鉴定。扩增体系及循环程序均参照试剂盒要求，在Roche Light Cycler 480Ⅱ上完成扩增。 　　1.4 结果的判读与分析 　　根据Roche Light Cycler 480Ⅱ分析软件进行分析，得到各标本的肠道病毒通用性RNA的检测结果。每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立：无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；Ct值≤37.0报告该反应阳性；37.0Ct值40.0为灰区。 　　2 结果 　　3岁儿童占64.2%，5岁儿童占87.2%，EV71阳性患者143例，CA16阳性患者6例，其他肠道病毒21例（表1）。19例EV71阳性重症患者中，农村患儿占68%（13/19），城市患儿占32%（6/19）；1岁患儿中，男5例，女1例；2岁以下患儿男6例、女1例；3岁以下患儿男3例、女0例；4岁以下患儿男女均0例；5岁以下患儿男3例、女0例；男性占89%（17/19），女性占11%（2/19）。 　　3 讨论 　　HFMD是由肠道病毒感染引起的儿童传染病，传染性强，传播途径广，速度快，流行强度大，短期内可引起大流行。1957年新西兰首次报道H