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苇蘑液体培养条件优化 　　摘 要：通过苇蘑菌丝体液体培养的单因素试验，初步确定苇蘑的较适生长条件：pH值为5～7；温度 25 ℃；转速 100～200 r?min-1；装液量50～90 mL。再经正交试验对培养条件进行优化，得出苇蘑的最适制种工艺为：初始pH值为6；温度恒定为25 ℃；转速保持150 r?min-1；装液量为90 mL/250 mL。在该培养条件下，苇蘑的菌丝干质量可达到19.4 g?L-1。在通气量为4.5 L?min-1条件下进行苇蘑液体菌种的5 L发酵罐培养，在44 h即达峰值19.9 g?L-1。 　　关键词：苇蘑；液体培养；菌丝干质量 　　中图分类号：Q93-335 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.09.033 　　Abstract： The optimum growth condition of liquid culture for Weimo was studied by the way of single factor test， including pH， temperature， rotating speed and liquid volume. The results showed that the range of growth conditions of Weimo are as follows： pH 5～7， temperature 25 ℃， rotating speed 100～200 r?min-1 and liquid volume 50～90 mL. Then the optimal spawn-making for Weimo was concluded by three factors three levels orthogonal experiment， and they are pH 6， temperature 25 ℃， rotating speed 150 r?min-1 and liquid volume 90 mL. Under the optimal growth condition， the dry weight of Weimo could reach 19.4 g?L -1. And Weimo spawns grew to a peak value 19.9 g?L -1 after cultured by 5 L fermenter， 4.5 L?min-1 ventilation， 44 h. 　　Key words： Weimo；liquid culture；mycelium dry weight 　　苇蘑为蜡伞科（Hygrophoropsidaceae）、拟蜡伞属（Hygrophoropsis）蘑菇[1]，产于天津市宁河县七里海地区芦苇地。芦林苇海中多年败叶腐草厚积成为独特的苇蘑生长基质，在闷热的夏季形成特定湿度、温度和光照环境，苇蘑才破土而出。苇蘑味道极其鲜美，香味浓郁，远胜于其他蘑菇，当地人们采集后鲜食或晒干食用。近些年来，由于自然生态环境的变化，芦苇长势大不如前，苇地里形不成阴暗潮湿的环境，苇蘑等也就很少见到[2]。 　　目前国内外关于苇蘑的研究报道较少，班立桐等[3]初步研究了苇蘑不同溶剂粗提物组分的抗氧化活性，发现总提取物的抗氧化力最好，除总提取物外，苇蘑的乙酸乙酯可溶性组分总抗氧化力最高，苇蘑的脂溶性组分对超氧阴离子（O2-）清除能力低于水溶性组分，而对羟自由基（?OH???的清除能力相差不多。为了更好地保护这一珍贵的蘑菇品种，本课题组在获得苇蘑快速生长的液体培养基后，进一步研究苇蘑液体培养的最适生长条件，为更好地开发利用苇蘑提供依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 菌 种 　　苇蘑（Weimo）由天津农学院农学与资源环境学院生物技术系保藏。 　　1.2 培养基 　　（1）斜面培养基的制备[4-5]。取600 g草炭土，在一定量的清水中煮沸20～30 min，用4层纱布过滤，得滤液。向滤液中加入硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、葡萄糖、琼脂，待药品溶化后，补足水分，分装试管。 　　（2）液体培养基（g?L-1）：葡萄糖 15 g，乳糖 15 g，酵母膏 6 g，115 ℃灭菌20 min。 　　1.3 方 法 　　1.3.1 苇蘑培养条件的单因素试验 （1）设置pH梯度为4、5、6、7、8、9，按照最适培养基的配方，每组配制6个摇瓶，每瓶装液量为70 mL的培养基。接种完成后分别放入温度为20，25，30 ℃的恒温摇床中震荡培养，并观察记录。（2）将接种完成的三角瓶分别放入不同转速（100，150，200 r?min-1）的恒温摇床中培养7