02-核酸结构与功能.pptVIP

体内重要的核苷酸衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 tRNA的二级结构主要特征： 1.三环四臂 2.氨基酸臂3′端有CCA-OH的共有结构 3.D环上有二氢尿嘧啶（D） 4.反密码环上的反密码子与mRNA相互作用 5.可变环上的核苷酸数目可以变动 6.TψC环含有T和ψ 7.含有修饰碱基和不变核苷酸 Anticodon： Three-nucleotide sequence of tRNA that base-pairs with a codon in mRNA. 核酸的酸碱及溶解度性质 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 思考题： 名词解释： Tm 、ribozyme 、增色效应 、核酸分子杂交 核酸分子杂交(hybridization)：热变性的ＤＮＡ经缓慢冷却过程中，具有碱基序列部分互补的不同的ＤＮＡ之间或ＤＮＡ与ＲＮＡ之间形成杂化双链的现象． 试比较蛋白质与核酸的异同? 简述tRNA二级结构的特点？ DNA双螺旋结构模型的要点是什么？ 请简要回答DNA与RNA组成上的异同 核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。 一、核酸分子具有强烈的紫外吸收 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 定义 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 常见因素：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 协同性的DNA解链 高温或极端的pH DNA的变性 部分变性DNA的电镜图像 变性后理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 解链温度(melting temperature，Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化 三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链 当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation) 。 减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 Hypochromism：A decrease in the absorbance coefficient as DNA renatures from the single-stranded to the double-stranded form. 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) 核酸分子杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用 两条多聚核苷酸链在空间的走向呈反向平行(anti-parallel)。两条链围绕着同一个螺旋轴形成右手螺旋(right-handed)的结构。双螺旋结构的直径为2nm，螺距为3. 4nm。 脱氧核糖和磷酸基团组成的亲水性骨架位于双螺旋结构的外侧，疏水的碱基位于内侧。 双螺旋结构的表面形成了一个大沟(major groove)和一个小沟(minor groove)。 （二） DNA双螺旋结构模型要点 1.DNA是反向平行、右手螺旋的双链结构 2.