通心络胶囊对全脑局灶脑血大鼠脑缺血耐受及脑源性神经营养因子影响.docVIP

通心络胶囊对全脑局灶脑血大鼠脑缺血耐受及脑源性神经营养因子影响 　　摘要：目的 采用全脑一局灶脑缺血耐受大鼠模型，观察通心络胶囊对脑缺血耐受作用的影响。方法 线栓法制备大鼠全脑缺血－局灶脑放血再灌注模型(PC－MCAO)及局灶脑缺血再灌注模型(MCAO)。在不同缺血时间点观察通心络组、PC－MCAO组及MCAO组大鼠神经行为评分，用免疫组化法检测脑源性神经营养因子(BDNF)阳性细胞数。结果 神经行为评分在通心络组、PC－MCAO组和MCAO组的2h组之间无统计学意义(P0.05)，通心络24h，3d，5d组均显著低于对应时程的PC－MCAO组和MCAO组(P0.05)；各组缺血半暗带BDNF阳性细胞数均增高，但通心络组的阳性细胞数显著高于对应时程的PC－MCAO组和MCAO组(P0.05)。结论 通心络胶囊能提高大鼠局灶脑缺血半暗带BDNF的表达水平，促进神经元的修复，诱导脑缺血耐受。 　　关键词：通心络胶囊；脑源性神经营养因子；缺血预处理 　　中图分类号：R743.3 R285.6　文献标识码：A　文章编号：1672－1349(2007)10－0961－03 　　 　　有短暂性脑缺血发作(TIA)史者脑卒中的发病风险更高，因此，预防TIA病人脑卒中复发十分重要。新近的研究结果显示，通心络胶囊不仅可以治疗急性缺血性脑卒中，也可用于TIA病人的二级预防。本研究旨在观察通心络胶囊对全脑缺血后再次局灶脑缺血再灌注大鼠的脑源性神经营养因子(BDNF)的影响，探讨BDNF与脑缺血耐受的关系及通心络胶囊的干预作用，研究通心络胶囊在二级预防中的神经保护作用及其机制。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1　药物与试剂 通心络胶囊，河北以岭药业股份有限公司生产，主要由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片等组成。兔抗大鼠BDNF单克隆抗体为北京中山生物技术有限公司生产。免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。水合氯醛、肝素钠、4％多聚甲醛均由四川大学华西医学中心基础医学院临床药理前基地动物实验室提供。 　　1．2　实验动物与分组 130只清洁级健康成年SD雄性大鼠，体重(240～270)g，四川大学华西医学中心实验动物中心提供。实验前在室温下(20℃～25℃)保持昼/夜各12 h，环境适应性喂养1周，给普通饲料和自??饮水。随机分为4组，即假手术组(10只)，大脑中动脉再灌注(MCAO)组(40只)，全脑缺血(PC－MCAO)组40只，通心络组40只，即全脑缺血3 min后给予通心络灌胃5d，1g/kg用蒸馏水配至1 mL，每日1次。所有大鼠在全脑缺血后当天开始灌胃。MCAO组在再灌注2h，24h，3d，5d后取材，PC－MCAO组及通心络胶囊组分别在第2次再灌注2h，24h，3d，5d后取材。假手术组在实验开始5d后取材。 　　1．3　大鼠全脑－局灶缺血模型 　　1．3．1　全脑缺血模型 采用Simon等制作全脑缺血模型的方法：用10％水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。将大鼠四肢和头部固定于手术台上，颈部备皮，常规消毒铺洞巾。行颈部正中切口，逐层分离暴露双侧颈总动脉。微动脉夹夹闭双侧颈总动脉3 min，观察大鼠瞳孔散大，翻正反射消失，即产生全脑缺血。术后提尾无前肢内收屈曲，爬行时无追尾，否则应剔除。 　　1．3．2　MCAO模型 采用改良的Zealonga线拴法。单沙尼龙线，直径0.285mm，加热将一端烤制光滑呈?球形，直径(0.25～0.28)mm，紫外线照射消毒备用。用10％水合氯醛350mg/k8腹腔注射麻醉大鼠。将大鼠四肢和头部固定于手术台上，颈部备皮，常规消毒铺洞巾。行颈部正中切口，逐层分离暴露左侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)，避免刺激迷走神经。经CCA切口插入尼龙线进入ICA约(18～20)mm至大脑中动脉近端，阻断大脑中动脉血供2h后抽出尼龙线。术后提尾右前肢内收屈曲，爬行时追尾现象为成功标志。术中用烤灯维持环境温度(37.0～37.5)℃。所有大鼠只栓塞左侧大脑中动脉。 　　1．4　神经行为学评分 MCAO后24 h采用Zealonga评分法。0分：无神经功能缺失症状，活动正常者；1分：不能完全伸展对侧前爪者；2分：爬行时出现向右转圈者；3分：行走时，身体向偏瘫侧倾倒者；4分：不能自发行走，意识丧失者；5分：死亡。评分为0分和4分以上剔除，随机补充保证每组10只。 　　1．5　脑组织切片制备及BDNF免疫组化染色 各组大鼠在规定的时间用10％水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉。开胸，经左心室灌注37℃的肝素钠生理盐水100 mL冲净血液，再灌注40℃4％多聚甲醛200 mL。开颅取脑，置于4％多聚甲醛中保存(24～48)h。取视交叉前后2 mm的