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转基因植物发根农杆菌研究进展及应用 　　摘 要：农杆菌转化法作为植物基因工程使用最广泛的转化方法之一，分为根癌农杆菌Ti质粒和根瘤农杆菌Ri质粒2种类型。发根农杆菌（A gmbacterium rhiz-ogenes）的Ri质粒能够诱导植物产生毛状根。本文阐述了发根农杆菌的特性及 Ri质粒的分类、结构特征和转化特点，介绍了发根农杆菌在实际生产中的应用，分析了影响发根农杆菌成功转化的因素，综述了发根农杆菌在理论研究、植物基因工程、植物品种改良、植物次生代谢产物生产和植物栽培生根等方面的应用，并指出未来领域研究的着重点。 　　关键词：发根农杆菌；Ri质粒；研究进展；应用 　　中图分类号：Q943 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170833061 　　目前，转基因植物转化的方法主要有农杆菌转化法、花粉管通道法、核显微注射法、基因枪法等，农杆菌介导的遗传转化体系是在植物基因工程中相对完整、成熟的方法之一。在转基因植物中有80%以上是由农杆菌转化的，但是其中大部分是由根癌农杆菌Ti质粒转化获得的[1]。1907年，Smith和Townsend 发现发根农杆菌（A grobacterium rhizogenes）能诱导植物形成毛状根（hairy root），1934年Hildebrand就报道了发根农杆菌（A grobacterium rhizogenes）感染苹果树能诱导产生毛状根（hairy root）[2]。1977年，Montoya等首次应用Ti质粒作为载体将T-DNA上的农杆碱基因转入烟草细胞[3]，标志着遗传转化新时代的到来。植物转基因技术逐步走向成熟，并成为植物基因工程改良新品种的基础技术。1982年，Chilton 报道发根农杆菌（A grobacterium rhizogenes）能诱导植物产生发状根（Hairy root），这种发状根又被称为毛状根，是由发根农杆菌所含有的 Ri质粒（Root inducing plasmid）引起的，Ri质粒不仅是遗传转化的优良载体 ，而且可直接感染植物细胞[4]。与根癌农杆菌Ti质粒相比 ，根瘤农杆菌Ri质粒转化具有以下优点；用Ri质粒作为基因载体时，不需要通过“解除武装”（disarmed）就可以很容易地从转化来的细胞上获得再生植株，即用野生型发根农杆菌感染植物可直接再生出完整的植株；由发根农杆菌转化的植物，其产生的毛状根均来源于同一个植物细胞[5]。毛状根的每一个细胞都是转基因的，更加有利于遗传操作；根瘤农杆菌Ri质粒不含onc基因，对再生植物的染色体影响极小；由发根农杆菌Ri质粒转化所产生的毛状根分化为正常植株的分化率高，倍性稳定，遗传稳定，并且容易建成一系列能够在不同植物细胞核染色体上插入一个T-DNA拷贝的株系[6]。尽管发根培养技术的发展历史虽然较短，但Ri质粒作为植物基因工程载体已显现出其可行性与方便性。随着科学研究的逐步深入，它将会成为比Ti质粒更理想的基因转移系统。更多的次生代谢物将会通过发根培养系统来生产，并被用于难以插活植物的生根和生产外源基因产品，特别是在获得转基因植物、培育新品种等方面存在广阔前景。 　　1 发根农杆菌及Ri质粒特征 　　1.1 发根农杆菌 　　发根农杆菌（A grobacterium rhizogenes）属于根瘤菌科（Rhizobitaceae）农杆菌属（A grobacterium）的革兰氏阴性菌。发根农杆菌是一类宿主范围广泛土壤杆菌，在侵染植物后，能够诱导植物产生大量高度分支的不定根，通常称为发根。发根农杆菌侵染植物所产生的发根具有生长速度快、分化程度高、生理生化和遗传性稳定、易于进行操作控制等特点[7]。发根农杆菌的致根特征结构包括染色体毒性基因（Chromosomal Virulence，ChV） 和Ri质粒2个部分。ChV是发根农杆菌的染色体基因，它的活化表达与发根农杆菌在植物细胞壁的附着有关。Ri，质粒是发根农杆菌染色体外的一个具有侵入性的质粒。在自然状态下，发根农杆菌通过伤口入侵植物，Ri质粒上的T-DNA能插入植物基因组，其上所?y带的基因在宿主细胞中整合表达，使植物产生毛状根。发根农杆菌的宿主范围随菌株的不同而发生变化[8]。发根农杆菌能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子。到目前为止，已有160 多种植物成功诱导出了毛状根，大多数集中在茄科、菊科、十字花科、旋花科、伞形科、豆科、石竹科、蓼科等，主要是草本植物，而木本植物较少有成功的报道 [9]。 　　1.2 发根农杆菌 Ri质粒的分类及基本特征 　　1.2.1 Ri质粒的分类 　　根据其合成冠瘿碱的不同，可将Ri质粒分为4种类型：甘露碱型（Mannopine Type），合成甘露碱及其酸、农杆碱酸与农杆碱