通痹合剂对完全佐剂性关节炎大鼠抗炎消肿降低血清中IL―6NO作用实验研究.docVIP

通痹合剂对完全佐剂性关节炎大鼠抗炎消肿降低血清中IL―6NO作用实验研究 　　摘要： 　　目的：探讨通痹合剂治疗风湿及类风湿性关节炎的机理。方法：用完全佐剂造成大鼠关节炎模型，经通痹合剂治疗后，检测关节炎大鼠的足跖关节肿胀度，观察病变关节组织的炎症病理变化和血清中IL-6、NO含量的影响。结果：与正常对照组大鼠相比，RA模型大鼠关节组织中出现炎症病变，血清中IL-6、NO含量显著升高（P0.05）， 与RA模型组相比通痹合剂高、低剂量组大鼠病变关节组织的炎症受到抑制关节肿胀度和血清中IL-6、NO含量和显著降低（P0.05），但显著高于正常组（P0.01），与阳性药正清风痛灵组无差异。结论：通痹合剂对完全佐剂造成的大鼠关节炎有抗炎消肿、改善病变关节组织的炎症状况、降低血清中IL-6、NO作用。 　　关键词：通痹合剂；抗炎消肿；IL-6；NO；完全佐剂；风湿性关节炎 　　【中图分类号】 　　R917 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0010-01 　　通痹合剂是以治疗风湿及类风湿性关节炎为主的中药制剂，属通痹灵系列剂型之一。此药已在我院临床使用多年，疗效较佳。本实验根据通痹合剂舒筋活血、通络止痛等主要功效，观察其对完全佐剂造成的关节炎大鼠的病变关节组织的抗炎消肿和关节炎症组织形态的病理改善，及降低血清中IL-6、NO作用，了解通痹合剂治疗风湿及类风湿性关节炎的作用机理的实验研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物：清洁级SD大鼠，雄性、动物合格证号： 2001A046。动物购自广东省医学实验动物中心。 　　1.1.2 药物与试剂：（1）药物[1]。通痹合剂，批号020715，提供单位：广州中医药大学第一附属医院。2.正清风痛灵肠溶片，批号0009103，提供单位：湖南正清制药集团股份有限公司。（2）试剂与仪器：弗氏完全佐剂（adjuvant complete freund，美国Difco产品。）；一氧化氮试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；IL-1放免试剂盒，购自北京东亚生物技术研究所。显微镜， 6010型紫外-可见分光光度计（惠普上分），BX40型显微镜日本 奥林巴斯公司。酶标仪 （BIO-RAD）model 550。 　　1.2 方法 　　1.2.1 AA大鼠模型的建立于大鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂0.1mL，诱发佐剂性关节炎[1]。 　　1.2.2 血清中白细胞介素IL-1 的检测：采用放免法：按试剂盒说明书上的方法测试。 　　1.2.3 血清中NO测定：比色分析法：按试剂盒说明书上的方法530nm处比色，测光密度。 　　1.2.4 实验分组及给药：大鼠试验前大鼠饲养三天后随机分为五组（1）正常组（2）正清风痛灵肠溶片组（48mg/kg/体重/日）（3）RA模型组（4）通痹合剂高剂量组（100%通痹灵合剂20g/kg/体重/日（5）通痹合剂低剂量组（50%通痹灵合剂20ml/kg/体重/日）。除正常组外，其余四组复制佐剂性大鼠关节炎模型，造模14天后测量大鼠右后肢体积（灌胃前），作为肿胀的初始体积指标。第15天后每组鼠分别按剂量灌胃连续给药8天，正常组和RA模型组给予等体积生理盐水。在造模后的第21天处死大鼠，测量各组大鼠致炎肢肿胀度（V灌胃后-V灌胃前），取血清检测IL-6、NO，然后做后肢关节病理切片检查。 　　1.5 血清中IL-6、NO检测：按试剂盒中说明书的方法进行检测。 　　1.6 统计学方法：采用SPSS软件统计，比较组间差异。 　　2 结果 　　2.1 一般外观观察：与正常组相比造模后的大鼠均出现程度不同的异常现象，如食量减少，毛色暗无光泽，自发活动减少，疲乏，消瘦等， RA模型组尤其严重。 　　2.2 通痹合剂对弗氏佐剂性关节炎大鼠血清中IL-6、NO的影响（x±s） 　　通痹灵合剂能显著降低弗氏佐剂性关节炎大鼠血清中IL-6、NO，其作用强度随剂量增大而增强（表1）。 　　4 病理观察 　　以上各组大鼠处死后剪后肢，剥皮，经甲醛固定，常规脱水，脱钙，做关节切片，染色后光镜下观察。结果如下： 　　与正常组相比：RA模型组软组织炎症严重，关节滑膜呈绒毛状增生， 绒毛间质?小血管增生明显，大量淋巴细胞及浆细胞浸润，局部见淋巴小结。通痹合剂高剂量组：滑膜病变和软组织炎症减轻，散见小血管增生及淋巴细胞及浆细胞浸润，未见淋巴小结.且个别治疗鼠表现为滑膜正常，软组织正常。 通痹合剂低剂量组，使滑膜病变和软组织炎症减轻。但治疗效果明显逊于通痹合剂高剂量组.正清风痛灵肠溶片治疗效果与通痹合剂高剂量组相比无明显差异.结果显示：，通痹合剂使佐剂造成关节炎大鼠的病变关节组织的炎症受到抑制，，使鼠关节病变组织趋于正常