花粉管通道法介导的铁皮石斛转基因技术-广西植物.PDFVIP

－ 　 Ｇｕｉｈａｉａ － ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｇｕｉｈａｉａ ｊｏｕｒｎａｌ．ｃｏｍ 　 Ｓｅｐｔ．２０１７，３７（９）：１１０１ １１１０ ＤＯＩ：１０．１１９３１／ ｇｕｉｈａｉａ．ｇｘｚｗ２０１６０８０３４ － 引文格式：冼康华，付传明，何金祥，等． 花粉管通道法介导的铁皮石斛转基因技术 ［Ｊ］． 广西植物，２０１７，３７（９）：１１０１ １１１０ － ＸＩＡＮ ＫＨ，ＦＵ ＣＭ，ＨＥＪＸ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｂｙ ｐｏｌｌｅｎ⁃ｔｕｂｅ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ ［Ｊ］． Ｇｕｉｈａｉａ，２０１７，３７（９）：１１０１ １１１０ 花粉管通道法介导的铁皮石斛转基因技术 冼康华，付传明，何金祥，龚庆芳，苏　 江，黄宁珍∗ （ 广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室， 广西壮族 自治区 广西植物研究所，广西 桂林 ５４１００６ ） 中 国 科 学 院 摘　 要：该研究以含有ＧＦＰ和ＧＵＳ基因的质粒和农杆菌为载体，采用花粉管通道法对铁皮石斛进行转基因技 ⁃１ 术研究。 结果表明：（１）铁皮石斛种子萌发和原球茎生长对卡那霉素的最低致死浓度分别为９０和１５０ ｍｇ ·Ｌ 。 ⁃１ 进一步研究证实，在筛选转化种子和原球茎时，可分别向培养基中添加 １００和１５０ ｍｇ ·Ｌ 的卡那霉素进行选择 培养。 （２）以携带ＧＦＰ和ＧＵＳ基因的质粒（ｐＳｕｐｅｒ１３００和ｐＢＩ１２１）和农杆菌为载体，用无菌去离子水重悬质粒 ⁃１ ＋ ＋ ＋ ＋ ｐＳｕｐｅｒ１３００和ｐＢＩ１２１至浓度为１００ ｎｇ ·μＬ ，用２％蔗糖 １／ ２ＭＳ ０．１％ ｓｉｌｗｅｔ⁃７７ ０．１％ ＡＳ或５％蔗糖 ０．１％ ｓｉｌ⁃ ⁃１ ＋ ＝ ｗｅｔ⁃７７ ０．１ｍｍｏｌ ·Ｌ ＡＳ重悬携带质粒ｐＳｕｐｅｒ１３００和ｐＢＩ１２１的农杆菌至菌液浓度为ＯＤ ０．７～０．８；在授粉后 ６００ ０．５～２．５ｈ 内使用柱头滴加法导入携带外源基因的质粒或