针刺背俞穴对慢性疲劳大鼠外周血T淋巴细胞亚群影响.docVIP

针刺背俞穴对慢性疲劳大鼠外周血T淋巴细胞亚群影响 　　【摘 要】目的：通过观测模型大鼠的外周血T淋巴细胞亚群的CD+4、CD+8含量和比值变化及针刺“背俞穴”对其的调节作用，研究CFS大鼠免疫功能的改变及针刺对其的治疗作用，旨在揭示CFS的发病机理及筛选有效的治疗方法，进一步探讨针刺治疗CFS的作用机制。方法：将实验动物随机分为空白组、模型组、针刺组与药物组。通过强制冷水游泳和慢性束缚交替的方法造模，制备慢性疲劳综合征大鼠模型。空白组不予造模和治疗。模型组造模后不予治疗。治疗组在造模的同时进行治疗。针刺组参照《实验针灸学》取两组穴位：①肺俞、心俞，②肝俞、脾俞、肾俞，两组穴位隔日交替进行针刺治疗；药物组给予人参皂甙液灌胃治疗。实验结束后，采用Beckman FC500型流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群的CD+4、CD+8含量和比值变化。结果：外周血T淋巴细胞亚群的CD+4、CD+8含量和比值变化：与空白组对比，模型组CD+4含量明显降低，CD+8含量明显升高，CD+4、CD+8比值显著降低；与模型组对比，针刺组、药物组CD+4含量明显升高 （P0.05）。结论：慢性疲劳大鼠外周血淋巴细胞各亚群比例异常，提示其免疫功能失衡，而针刺“背俞穴”可调节慢性疲劳大鼠的免疫功能，从而达到有效治疗CFS的临床治疗手段。 　　【关键词】针刺；背俞穴；慢性疲劳；细胞免疫功能 　　【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0050-02 　　慢性疲劳综合征（chronic fatigue syndrome，CFS）是一种在当代快速生活节奏下机体出现的以持续疲劳，活动减少为主要表现，持续时间≥6个月的症候群，并由美国疾病控制和预防中心（（Centers for Disease Control and prevention，CDC）于1988年正式命名[1]。CFS常伴有头痛、咽喉痛、腺体压痛、肌肉关节疼痛（或僵硬）、低热（或自觉发热）、注意力不易集中、记忆力差、睡眠障碍、抑郁以及多种神经精神症状等非特异性表现的综合征，各项体格检查及实验室检查无明显的异常，排除其他疾病，诊断可确立。既往研究表明，CFS 患者细胞免疫功能异常[2]，为此，本研究使用流式细胞术检测了模型大鼠的外周血T淋巴细胞亚群的CD+4、CD+8含量和比值变化[3]及针刺“背俞穴”对其的调节作用，并探讨针刺“背俞穴”在CFS发生发展中可能发挥的作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料及实验条件 　　1.1.1 实验动物 　　3月龄SPF级SD大鼠40只，体重160-180g，雌雄各半，由广州中医药大学大学城校区实验动物中心提供。 　　1.1.2 动物实验室 　　广州中医药大学三元里校区动物实验中心实验室，SPF级：温度22±2℃，相对湿度60-80%，正常光照，定时通风换气。 　　1.1.3 动物饲养 　　各组动物均在广州中医药大学三元里校区动物实验中心实验室中雌雄分开、分笼饲养。喂养鼠料为普通全价鼠料Ⅰ号（含蛋白0.23g，脂肪0.047g，钠盐0.0024g），由北京科澳协力饲料有限公司生产。 　　1.1.4 实验设备 　　（1）药物与器械： 　　针灸针（0.2*13mm，环球牌，由苏州针灸用品有限公司生产）、人参皂甙粉剂（含量：95%，由广州威佳责任有限公司提供，批号：110512）、秒表、温度计、灌胃注射器。 　　（2）造模与检测用具： 　　特制的硬塑料束缚筒：管状，长20cm，筒口外径6cm，内径5.3cm，筒内前端置一直径略小于筒的内径、并可以前后调节的无底、圆嘴玻璃瓶，其瓶口为通气口（距离筒口5cm左右），后端为可开关闸门。 　　游泳箱（2个）：规格为185cm×58cm×73cm。 　　自制敞箱：为立方体，高40cm，长、宽均为80cm，周壁、底面为黑色，底面用白线划分为面积相等的25个方块。 　　（3）主要仪器及试剂： 　　GG系列电子天平，型号：JJ1000/d=0.02g；Sarlorius电子天平，型号：BL150/d=0.01g。荧光抗体FITC-CD4 /PE-CD8 （ 美国BD 公司） 、10 × 溶血素（美国BD 公司） ； 荧光校准微球Flow Check（ 美国BeckmanCoulter Immunotech 公司） ； Beckman FC500型流式细胞仪（ 美国BeckmanCoulter Immunotech 公司） 。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物分组 　　3月龄SPF级SD大鼠40只，根据随机数字表法将大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组和药物组，每组雌雄大鼠各5只，共10只，雌雄分笼饲养。 　　1.2.2 制备动物模型 　　大鼠饲养于广州中医药大学三元里