第十一章分子生物学课件PPT（PCR技术）.pptVIP

防止污染的具体方法 实验室要求：为?PCR?样品配制和扩增后分析设计隔离的区域； 操作要求：使用抗气雾剂移液管阻止气雾剂进入?eppendorf?管内；在准备新反应前更换手套；试验用器材高压消毒或10％次氯酸钠消毒、清洁实验台面、254nm波长紫外线照射；减少开盖次数 设置对照：阴性对照、阳性对照、内对照；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。 UNG防污染：在?PCR?反应液配制时，将dUTP和dTTP?按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对?UNG?敏感，在?PCR?前对新配制的反应用?UNG?处理以破坏残余产物，杜绝污染。 在扩增产物到达阈值线时： Xct=X0(1+Ex)Ct=M （1）Xct：荧光扩增信号到达阈值信号强度时扩增产物的量，在阈值线设定以后，它是一个常数，设为M。方程式（1）两边同时取对数得： ㏒M= ㏒X0(1+Ex)Ct （2）整理方程（2）得： ㏒X0=﹣㏒(1+Ex) *Ct+㏒M （3）最后结论： ㏒X0与Ct呈线性关系，根据样品设置的Ct值就可计算出样品中所含的模板量。 四、荧光定量PCR的临床应