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高分子―顺铂键合物合成与药效研究 　　摘要：有关降低顺铂毒副作用的研究自1969年顺铂投入市场以来就从未停止过，但是，顺铂的水溶性低、重度消化道反应、骨髓抑制等问题仍未得到有效解决。本文利用高分子键合药技术，制备了一种高分子与顺铂的键合物，其粒径较小，铂含量达到11.3%，对乳腺癌细胞MCF-7的IC50值为9 μg/mL，实现了对顺铂的有效保护和靶向输送，提高了肿瘤治疗效果。 　　关键词：高分子键合药；顺铂；乳腺癌；靶向输送 　　中图分类号：TQ463文献标识码：A文章编号：1671―1580（2014）12―0143―03 　　一、实验部分 　　1.仪器和试剂 　　岛津紫外光谱仪（UV-2401PC）、场发射扫描电镜、高分辨透射电子显微镜、原子力显微镜、各种细胞培养设备（培养箱、酶标仪、超净台等）、CRI Maestro小动物活体成像系统、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、动态光散射仪ICP-MS等。试剂包括2，3二甲基顺丁烯琥珀酸酐、聚乙二醇、赖氨酸、三氯一胺合铂酸钾及其他常规分析纯试剂。 　　2.实验步骤 　　（1）可生物降解的高分子―顺铂键合物的设计与合成 　　合成两嵌段比例不同的聚合物MPEG-b-PLL来作为高分子载体，它是完全水溶性的，但后期与顺铂键合后，同样可以制备成纳米胶束。图1为MPEG-b-PLL的拟合成路线： 　　图1 MPEG-b-PLL的合成 　　如图2所示，通过聚赖氨酸PLL的侧氨基用来与铂配位键合将两者连接起来[1]： 　　将上述高分子―顺铂键合物与酸敏感的2，3二甲基顺丁烯琥珀酸酐的键合，形成带有羧基的材料，其合成路线如图3所示： 　　图2 顺铂与高分子的配位合成图3 高分子电荷反转体系-顺铂键合物 　　（2）高分子―顺铂键合物靶向纳米胶束的合成与制备。制备与带药高分子结构类似的带靶向基元的嵌段聚合物，与带药高分子混合组装，获得靶向纳米胶束[2]。 　　（3）高分子―顺铂键合物的体外释放实验与细胞实验 　　体外释放实验采用PBS缓冲溶液做释放介质，以pH=7.4的PBS溶液模拟人体血液或正常组织液，以含有适量还原介质（硫醇、谷胱甘肽、DTT等）且pH=5.0的PBS溶液模拟肿瘤组织细胞环境，考察高分子―顺铂键合物的释放行为。细胞摄取的实验，拟在高分子―顺??键合物存在下先进行细胞培养，然后直接测定细胞存活率。 　　二、结果讨论 　　1.可生物降解的高分子―顺铂键合物的合成 　　首先，我们合成了端氨基化的PEG单甲醚大分子引发剂。图4a是聚合物mPEG-NH2的1HNMR图。图中3.65 ppm为PEG 的亚甲基峰（-OCH2CH2-）， 2.88 ppm是与氨基相邻的亚甲基峰（-OCH2CH2NH2）。表明了端氨基化PEG的成功合成。 　　在此基础上，我们进一步以端氨基的聚乙二醇为大分子引发剂制备一系列两亲性嵌段共聚物PEG-b-PLL。所得聚合物1HNMR谱如图4b所示，峰4.26 ppm是谷氨酸主链上次甲基的信号峰，峰3.6 ppm为PEG上?CCH2CH2O的信号。PLL的聚合度DPPLL由聚合物中?CCH2CH2O （b 3.6 ppm） 与4.26 ppm的峰面积计算得到。如表1所示，DP值与投料比成线性关系，说明NCA开环聚合过程是“活性”聚合过程。 　　图4 聚乙二醇-聚-（γ-肉桂基-L-谷氨酸）的1H NMR 　　表 1 嵌段共聚物PEG-b-PCLG的各项性质 　　Entry1DPa1Mbn 　　（103）1Mbw 　　（103）1PDIb1Dch 　　（nm）mPEG113-b-PL3121.411.171204mPEG113-b-PL0117.711.111187mPEG113-b-PL7113.111.121171mPEG113-b-PLL1011019.7113.511.071153核磁计算结果：b GPC结果， c流体力学直径。 　　2.高分子―顺铂键合物靶向纳米胶束的合成与制备 　　以三氯一胺合铂酸钾与mPEG-PLL的侧链氨基进行键合，在高分子的侧链形成带有类似顺铂结构的药物分子，相当于顺铂悬垂在高分子主链上，通过透析法除去没有配位键合上的小分子三氯一胺合铂酸钾。进一步将上述高分子―顺铂键合物与酸敏感的2，3二甲基顺丁烯琥珀酸酐键合，形成带有羧基的材料，降低高分子―顺铂键合物的表面电位，这有利于其在血液中的稳定性，在高分子―顺铂键合物到达病变部位后，由于万博格效应，2，3二甲基顺丁烯琥珀酸酐从聚赖氨酸侧基上脱除，使高分子―顺铂键合物的表面电位升高，在有利于其被细胞摄取的同时纳米胶束链间产生电荷斥力，从而发生解离释药。完成化学制备过程后，同样应用透