水杨酸 3 羟化酶通过调停水杨酸分解代谢控制拟南芥叶片寿命.docVIP

水杨酸-3-羟化酶通过调停水杨酸的分解代谢控制拟南芥叶片寿命 植物激素水杨酸（SA）在植物的防御机能、应激反应和衰老中起着重要的作用。尽管SA的生物合成（途径）已经被很好的了解了，但是SA是以哪种方式被异化分解代谢还是难以捉摸的。我们在叶片的衰老期中找到一种涉及到SA的异化分解的物质—水杨酸-3-羟化酶，并在这篇文章中报道该酶鉴定方法和特性描述。在植物衰老期间，S3H（水杨酸-3-羟化酶）可以通过SA诱导的与植物衰老产生联系，并且是SA标准的负反馈调节系统中的一个关键部分。这种酶将SA（Km=58.29μM）转变为2,3-2羟基苯甲酸和2,5-2羟基苯甲酸在试管内但是仅仅2,3-2羟基苯甲酸是活泼的（估计是有活性的）。S3H淘汰的突变体未能产生2,3-2羟基苯甲酸糖耦合物（偶联物），因此积累了非常高水平的SA（这里估计指含量）以及SA的糖耦合物，然后使植物过早的呈现出衰老的迹象。相反的，S3H（突变产生了功能，估计能分解SA和它耦合物的S3H）列出了一个现象，包含高水平含量的2,3-2羟基苯甲酸耦合物以及极低水平的SA和它的耦合物，展示了一个令人注意的可以延长叶片寿命的能力。这篇文章揭示了一个简洁的SA异化代谢的机理即植物调节SA含量通过将SA转变为2,3-2羟基苯甲酸来阻止SA积累过多。这篇文章也提供了一个强有力的分子基因证据关于SA在调节叶片衰老的起始和评估（rate和onset）中起着重要的作用。 SA（水杨酸，又称2-羟基苯甲酸），是一种酚类化合物，已经被人类分析利用其医学价值200多年了，最近其作为一种植物激素在植物抗病、叶片衰老、开花和生热作用（产热机能）也已经被更多的研究开发出来。SA在植物防御功能和超敏反应（一种植物快速编程性细胞死亡的形式）中扮演的角色也已经被集中地调查出来。叶片衰老是一种慢速的编程性细胞死亡，在这种过程中可以允许植物把衰老细胞中的营养品释放并运往种子、贮藏器官或者有活性的正在成长的组织。尽管有关SA在叶片衰老中所扮演的角色还不是很清楚，但是这里还是有一些事实能证明SA的重要作用：在疾病预防和叶片衰老这两者似乎分享了SA的信号传递和管理中某些部件（成分）。 已经有更多的研究来指出SA的生物合成。在植物中，有两种SA的生物合成途径：1.PAL（苯基丙氨酸氨基裂解酶）途径和IC（异分支酸合成酶）途径。两种途径都是使用分支酸的初级代谢产物。这个分支酸衍生物L苯基丙氨酸能够被转化为SA通过中间产物苯酸盐或者香豆酸经过一些列的酶促反应涉及到PAL、苯甲酸-2-羟化酶和其他通用酶。分支酸也能够被转化为SA通过异分支酸在2个步骤的处理下，期间涉及到异分支酸合酶（ICS）和异分支酸-丙酮酸裂解酶。在拟南芥中，2分子的ICS酶能将分支酸转化为异分支酸已经被证实；在病原体和紫外光的诱导下90％的SA可以有IC途径产生。 在植物中，SA可能会经历生物学相关的化学修饰，比如糖基化、甲基化以及氨基酸配合。SA已经被展示可以转化为SA糖耦合物、SA O-β葡萄糖苷（SAG）和水杨酰葡萄糖酯通过SA葡糖基转移酶。这些水杨酸的配糖体会主动地从细胞液转移到液泡中作为一种不活跃的储存仓库为以后转化回SA做准备。甲基化的不活跃的SA仅仅增加了SA的膜通透性和挥发性，因此可以允许更有效的长距离运输这种防御信号。氨基酸配合的SA可以被追踪到在被感染的拟南芥中。最近，高水平的2,3-和2,5-2羟基苯甲酸糖耦合物被发现在被感染的或者老化的拟南芥叶片中，它们看起来主要是SA的不活跃形式。SA在转基因拟南芥中表达出了细菌性的水杨酸羟化酶（NahG基因编码）被引导转化为邻苯二酚；这个NagG转基因植物因此被广泛的应用到涉及SA的植物防御和衰老的研究中。然而，这种酶，可以对2，3-和2，5-2羟基苯甲酸的形式作出解释的酶，可推测为SA羟化酶至今还没有被鉴定出来。在这篇文章中，我们报道我们的发现和特性描述关于独一无二的SA3-羟化酶能够将SA转化为2,3-2羟基苯甲酸，SA主要贮藏形式2,3-2羟基苯甲酸糖耦合物的前导物以及在SA的分解代谢，体内平衡以及叶片衰老的调控起着重要的作用。 结果 SAG108/S3H是一个衰老相关的基因且能够被水杨酸诱导。在4g10500是早先被鉴定的作为植物衰老基因关联的基因叫做SAG108通过我们先前的关于叶片衰老的分析在拟南芥中，被发现其编码有功能的S3H在这里被描述。RNA印迹技术分析显示S3H转录产物累积在正在衰老的叶片中，但是几乎很少被检测到在未衰老的叶片中，显示与广为人知的衰老相关转录因子AtNAP（Fig.1A）表达出相同的模式。 S3H调节植物衰老的起始和过程。为了研究S3H的生物功能，一个转移DNA（T-DNA）插入一段序列（SALK-059907）作为特征。这个序列包含一个T-DNA插入S3H的第