兔味觉细胞质膜的分离及其味感受活性鉴定.PDFVIP

( ) 第 24 卷第 1 期 南昌大学学报 理科版 Vol . 24 No . 1 ( ) 2000 年 3 月 Journal of Nanchang University Natural Science Mar . 2000 　　文章编号 　1006 - 0464 (2000) - 0 1 - 0006 - 05 兔味觉细胞质膜的分离及其味感受活性鉴定 曾庆红 　邓少平 (南昌大学 生命科学与食品工程学院 ,江西 南昌　330047) 摘 　要 :从活体小兔口腔割取舌头分离出含味蕾的舌表面 ,分切成感受甜 、咸 、酸 、苦的 4 部分 。采 用机械分离法和密度梯度离心法相结合的方法分离出含不同味受体的味细胞质膜 ,并建立了含活 性味受体细胞质膜重构 BL M 的方法 。用重构 BL M 对分离物进行了味感受活性鉴定 ,结果表明相 应的质膜对相应的味物质均有明显的兴奋性 ,而对其它味物质只有较低的兴奋性 ,证实了分离的 质膜中不同味觉感受活性的存在 。 关键词 :味细胞 ;膜分离 ;BL M ;膜电位 中图分类号 :Q73 ;Q434 　　　　文献标识码 :A 味觉是重要生理感觉之一 。味觉主要由舌来感受 ,舌面上有许多味蕾 ,味蕾中含有不同类 型的味细胞 ,味细胞在味物质的刺激下 ,产生兴奋并随之有跨膜的电位变化 ,其通过神经传导 到中枢味感受区产生味感觉 。目前人类对视觉和嗅觉等的机理已有很深入的研究 ,但对味觉 却缺乏应有的了解 ,关键问题是缺乏一种有力的实验模型 〔1〕。 〔2 〕 Chai - ho Lo 于 1972 年首先论述了哺乳动物牛舌味细胞质膜的直接分离 ,但结果比较 〔3 〕 粗略和混杂 ,可惜后续相应的工作极少 。Henkin 等 于 1979 年提出了分离 、纯化味蕾受体的 〔4 〕 方法 。Kinnamon 于 1988 年采用先分离上皮味蕾层后获取味觉细胞的方法 。因舌面味细胞 ( 相对较少和味受体与味物质相互作用力极弱 比其它受体与底物的相互作用力低一个数量 ) 级 ,加上味感受体系的复杂性 ,使味受体的分离纯化和特性研究极其困难 。分子生物学家尝 试纯化味细胞膜上受体体系 ,但至今仍然没有取得真正的成功 ,与味感觉有关的受体机制及其 味觉理论的研究仍然发展缓慢 。 ( ) 我们在系统研究了未修饰的人工双层脂质膜 Bilayer Lipid Membrane ,BL M 对不同味物 ( ) 质的反应信号特征后 ,试图分离纯化出各种味细胞质膜碎片 内含味受体与离子通道等 ,重构 到平板 BL M 上 ,研究味受体与味物质作用的膜电位兴奋性变化 ,尝试建立一种简单可行的味 觉信号传导的实验模型 , 以揭示味觉信息在味细胞膜原初界面的信号编码机制 。本文的目的 就是首先建立有效的味细胞质膜分离的实验方法 ,为后续研究奠定基础 。 1 　材料与方法 11 　实验材料 111 　实验动物 　小白兔 12 只 ,购 自北京医科大学的实验用兔 ,每只体重 2 kg 左右 。