共表达烟酸转磷酸核糖激酶和丙酮酸.PDFVIP

第 １２卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１２ Ｎｏ４ ２０１４年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ２０１４ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１４０４０１０ 共表达烟酸转磷酸核糖激酶和丙酮酸 羧化酶对大肠杆菌ＮＺＮ１１１产丁二酸的影响 梁丽亚，刘嵘明，苟冬梅，陈　 旭，马江锋，陈可泉，姜　 岷，韦　 萍 （南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１１８００） 摘　 要：构建了共表达烟酸转磷酸核糖激酶（ＮＡＰＲＴａｓｅ）和丙酮酸羧化酶（ＰＹＣ）的重组质粒ｐＴｒｃ９９ａ ｐｎｃＢ ｐｙｃ， 并考察了重组菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＺＮ１１１／ ｐＴｒｃ９９ａ ｐｎｃＢ ｐｙｃ 生产丁二酸的能力。 结果表明：重组菌ＮＺＮ１１１／ ｐＴｒｃ９９ａ ＋ ｐｎｃＢ ｐｙｃ 的ＮＡＰＲＴａｓｅ和 ＰＹＣ 的比酶活达到最高，分别为２０７５和 １０４ Ｕ／ ｍｇ，同时，辅酶ＮＡＤＨ、ＮＡＤ 及 ＮＡＤ （Ｈ）总量达到最高。 厌氧摇瓶发酵结果：４８ｈ 能够消耗１７５ｇ／ Ｌ的葡萄糖生成１４０８ｇ／ Ｌ的丁二酸，而丙酮酸的产 量大幅度降低，仅为０１１ｇ／ Ｌ。 本研究为基因工程菌大肠杆菌厌氧条件下发酵生产丁二酸提供了一定的基础。 关键词：厌氧发酵；大肠杆菌；烟酸转磷酸核糖激酶；丙酮酸羧化酶；丁二酸 － － － 中图分类号：ＴＱ９２１４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１４）０４ ００４９ ０６ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｎｄ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ｏｎ ｓｕｃｃｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＮＺＮ１１１ ＬＩＡＮＧ Ｌｉｙａ，ＬＩＵ Ｒｏｎｇｍｉｎｇ，ＧＯＵ Ｄｏｎｇｍｅｉ，ＣＨＥＮ Ｘｕ， ＭＡ Ｊｉａｎｇｆｅｎｇ，ＣＨＥＮ Ｋｅｑｕａｎ，ＪＩＡＮＧ Ｍｉｎ，ＷＥＩ Ｐｉｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＴｒｃ９９ａ⁃ｐｎｃＢ⁃ｐｙｃ，ｃｏ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙ ｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ （ＮＡＰＲＴａｓｅ） ａｎｄ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ （ＰＹＣ）， ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｕｃｃｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＺＮ１１１／ ｐＴｒｃ９９ａ⁃ｐｎｃＢ⁃ｐｙｃ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＮＡＰＲＴａｓｅ ａｎｄ ＰＹＣ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＺＮ１１１／ ｐＴｒｃ９９ａ⁃ｐｎｃＢ⁃ｐｙｃ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ２０７５ ａｎｄ １０４ Ｕ／ ｍｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．