茅苍术多糖的提取工艺研究（毕业学术论文设计）.docVIP

茅苍术多糖的提取工艺研究 1 概述 1.1 茅苍术的性质及作用 茅苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea (Thunb．)DG．或被苍术的干燥根茎。原本是茅山苍术的简称，其质量和疗效优异为历代医家推崇和肯定，江苏茅山地区被认为是茅苍术的地道产地。史载于《神农本草经》。味甘，苦；性温，归脾、胃、肝经。具有燥湿健脾，祛风散寒，明目的功效。主要用于脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿痹，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲等症[1]。中医临床使用历史悠久。《本草纲目》记载“苍术，山蓟也，又名仙术，异术言术者山之精也，服之令人长生辟谷致神仙，故有仙精，仙术之号”。其主产于江苏、湖北、河南等地。多糖类在自然界生物中广泛存在，具有广谱化学结构和生物功能，越来越受到人们的关注，其免疫、降糖等活性与其所含单糖、糖醛酸、蛋白等成分结构有密切的关系。现代药理研究认为苍术具有治疗胃溃疡、抗菌、抗缺氧、抗癌及治疗帕金森氏综合症等多种生物活性[2]。 1.2 茅苍术多糖的研究概况 江苏句容茅山为其道地产区，因而得名茅苍术。茅苍术不仅是一种燥湿健脾的常用中药，而且道家(尤其是茅山道士)用于抗衰老已经有两千多年的历史。迄今，对茅苍术的研究多集中在对挥发性成分的化学和药理研究上，对水溶性成分的研究报道较少，近年来已有报道苍术中的水溶性多糖具有肠免疫活性，对湖北产茅苍术的多糖作了研究，结果表明其具有肠免疫活性、抗假丝酵母菌感染等作用，且活性与多糖中阿拉伯半乳糖及糖醛酸性部位相关。但对苍术多糖的提取工艺研究国内外很少有见报道[3][4]。 本文对江苏茅山地区茅苍术多糖的工艺进行了研究和最佳工艺得率的多糖进行了分离纯化及含量测定，本研究采用热水提取方法，提取次数、提取时间、选取料液比及温度4个因素，在单因素实验的基础上，采用L9（3）正交实验对茅苍术水溶性多糖进行最佳提取工艺研究，用色谱等方法对茅苍术的多糖进行分析，对主要纯化多糖APW1～4，通过气相色谱等分析确定茅苍术多糖中各种单糖组成及比例，通过斜率校正系数法测定单糖的含量、糖醛酸含量及蛋白质含量，为进一步研究其化学结构和生物活性提供了基础。以期为茅苍术的进一步活性研究与应用提供依据[5]。 为了寻找茅苍术的有效成分，笔者对茅苍术进行了较系统的化学成分研究。通过单因素三水平等一系列实验，获得茅苍术的乙醇提取物——多糖，将茅苍术的乙醇提取物所得浸膏，通过溶剂萃取、硅胶柱色谱和重结晶等方法，分离得到14个化合物，经理化常数和波谱学数据鉴定，并与文献对照，鉴定出11个化合物，分别为伪蒲公英甾醇乙酸酯(I)、蒲公英赛醇乙酸酯(Ⅱ)、豆甾醇(Ⅲ)、白术内酯Ⅱ(Ⅳ)、白术内酯Ⅲ(V)、一桉叶醇(VI)、白术内酯Ⅳ(Ⅶ)、一谷甾醇(Ⅷ)、胡萝卜苷(IX)、葡萄糖(x)、蔗糖(XI)，其中化合物I～Ⅲ为首次从该植物中分离得到[6]。 多糖的提取方法很多，最常用的是加热回流提取。此外，还有超声强化提取，微波提取，碱提取法，酶解法提取等，本实验采用了热水提取后残渣再用碱水提取的方法提取茅苍术多糖[7]。 2 材料、仪器及试剂 2.1 材料 茅苍术采自江苏茅山自然保护区,为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb)DC．的干燥根茎。 2.2 仪器 UV-2102 PCS型紫外分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司) SHB一111循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司) ALRa冷冻干燥机(德国)R-200旋转蒸发仪(Buchi公司) METTLER AE240分析天平（上海梅特勒一托利多仪器有限公司） HH系列数显恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂） PHS-3C精密pH计（上海精密科学仪器有限公司） 101-1型不锈钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司） H66 MC超声清洗机（无锡超声仪器厂） 2.3 试剂 乙醇，石油醚，葡萄糖，苯酚，浓硫酸及其它试剂均为分析纯；双蒸水(本实验室自制)。 3 实验方法 3.1 茅苍术的预处理 将茅苍术根茎剪去须根，低温干燥，粉碎，过40目筛。 3.2 茅苍术的脱脂 精密称取干燥后过40目筛的茅苍术粗粉100g，用石油醚5倍体积加热回流4小时后趁热抽滤，弃去萃取液，药渣挥干石油醚后再加5倍体积的无水乙醇加热回流萃取4小时，除去萃取液。药渣低温（10℃）干燥，脱脂后的茅苍术供多糖提取用[8]。 3.3 茅苍术粗多糖的提取（热水提取法） 将脱脂后的药材粉末置于1 000mL单口圆底烧瓶中按设计的不同料液比加入蒸馏水，根据设计的不同温度，于恒温水浴中浸提，趁热抽滤，提取液经旋转蒸发仪浓缩至原液的1／5，缓缓加入95％的乙醇，使乙醇含量达80％(v／V)，于冰箱中静置12 h，可见大量的浅棕色沉淀析出，沉淀依次用无水乙醇，丙酮，乙醚淋洗,得疏松粉末后加适量水复溶