重金属镉对小麦苗期生长的影响--毕业论文设计.docVIP

1 引言 重金属是具有潜在危害的重要污染物。重金属不能被微生物分解,相反重金属离子可以在生物体内富集,并且生物体能够将某些重金属转化为毒性更强的金属有机化合物,因此重金属的环境污染问题日益受到人们关注。在污染环境的诸多重金属中,镉的毒性较强[1]。环境中的镉来源归于自然和人为两大来源,前者主要来自岩石和矿物中的本底值。后者的主要来源有工业含镉废水的排放和农业上含镉磷肥的施用[2]。重金属在植物体内积累到一定数量时,就会影响植物对营养元素的吸收、蒸腾作用、光合作用、呼吸作用等正常生理活动,改变植物细胞的超微结构，对植物造成伤害甚至引起植物死亡[3]。镉在作物中，特别是在可食部位的大量积累,可以通过食物链危害人和动物。人体也有长期积累镉的特性, 而且镉在人体代谢周期很长,长期食用高镉含量的食物，可以引起人体多种疾病[4，5]。20世纪60年代,在日本的富山县神通川流域，由于铅锌冶炼厂排放的含镉废水污染水稻田,居民长期食用含镉稻米和含镉水而造成镉中毒,镉进入人体后破坏人体骨骼系统, 使骨质变脆易折,也就是所谓的“骨痛病”[6]。据统计，我国仅镉污染的农田就超过上万公顷，而且还有上升的趋势[7]。 2 材料和方法 本实验选用的小麦为淮麦18，各处理用含镉0.05mmol/l，0.1mmol/l，0.2mmol/l，0.3mmol/l的Hoagland培养液培养，对照用不含镉的Hoagland培养液培养。选择饱满健康的种子，用自来水漂洗数次后，用NaClO消毒，再用蒸馏水清洗数次，浸种24小时。然后铺在细沙上催芽，保持湿润，等第一片真叶抽出后，选取生长健壮，大小一致的幼苗分盆移栽。用不含镉的培养液培养。第二片真叶抽出后，镉处理分别用含镉的培养液培养。毒害5天后测各项指标,以后每隔5天测一次。 2.1 测定方法 根系活力测定：TTC法。制作含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。称取小麦根尖样品0.5g，放入10ml试管中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空白实验）。把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，提出TTF。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）＝四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时间(h)][8] 叶绿素测定：96％乙醇法。称取剪碎的新鲜样品0.2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml96％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。把提取液过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以96％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度[8]。 过氧化氢酶活性：高锰酸钾滴定法测定。酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(Mg／g·Min)＝（A-B）×VT×1.7/（FW×V1×t）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(Ml)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(Ml)；VT:酶液总量(Ml)；V1:反应所用酶液量(Ml)；W:样品鲜重(g)；1.7:1Ml 0.1Mol／L的KMnO4相当于1.7MgH2O2[8]。 丙二醛含量测定：硫代巴比妥酸法。取样品0. 5 g置预冷的研钵中加5mL 0. 05mo l/L pH7.8磷酸缓冲液, 研磨成浆,匀浆于1500xg离心15 min, 上清液用作SOD活性及脂质过氧化测定。将1.5mL上述提取液加入2.5mL 0.5%的硫代巴比妥酸的三氯乙酸(TCA )溶液,于沸水中加热30min 后迅速冷却, 在5000 xg下离心10min, 测OP532, 减去600nm下非特异吸收值, 用ΔEmM(532- 600) = 155 L算MDA 含量, 以μmol/g·FW 表示[9]。 细胞膜透性：选取小麦一定部位上生长叶龄相似的叶子若干，剪下后，先用纱布拭净，称取二份，各重2g。 蒸馏水冲洗二次，并用洁净滤纸吸干。然后剪成长约1cm小段放入小玻杯中（大小以够容电极为度），在杯中准确加入蒸馏水20ml，浸没叶片。振荡2小时，用电导仪测定溶液电导率。 鲜重测量：取10株幼苗，洗净根系和叶片，用吸